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多肽百問百答系列
瀏覽量:1653 | 2024/5/11 16:01:18
常用的熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)組合有哪些?

DABCYL/ EDANS,DABCYL/6-FAM,TAMRA/6-FAM,Abz/Tyr(3-NO2), Mca/Dnp


同位素標(biāo)記多肽能提供哪些?

合肥肽庫生物科技可以提供一些穩(wěn)定同位素修飾的多肽,主要有N15, C13 以及D代修飾,由于穩(wěn)定同位素氨基酸原料都比較貴,建議選擇一些簡單氨基酸進(jìn)行標(biāo)記,如Gly,Val,Phe,Leu,Ala等。


影響多肽穩(wěn)定的因素有哪些?

影響合成多肽穩(wěn)定性的因素包括脫酰胺、氧化、水解、二硫鍵錯(cuò)配、消旋、β-消除、聚集等,研究顯示合成多肽中最常見的降解產(chǎn)物是脫酰胺產(chǎn)物、氧化產(chǎn)物、水解產(chǎn)物。在組成多肽的各種氨基酸中,天冬酰胺、谷胺酰胺易于發(fā)生脫酰胺反應(yīng)(尤其是在pH值升高和高溫條件下);甲硫氨酸、半胱氨酸、組氨酸、色氨酸、酪氨酸最易氧化,對光照也較為敏感;天冬氨酸參與形成的肽鏈較易斷裂,尤其是Asp-Pro和Asp-Gly肽鍵。由于一個(gè)多肽分子中通常會(huì)含有多種不穩(wěn)定性的氨基酸殘基或肽鍵,因此合成多肽可能的降解機(jī)制和降解產(chǎn)物較為復(fù)雜。而多肽的聚集主要是由于疏水作用引發(fā)的,盡管目前還很難準(zhǔn)確預(yù)測哪些多肽易發(fā)生聚集,但至少對于一些中長肽而言需對可能存在聚合物進(jìn)行研究。


Fmoc/tBu固相合成法(SPPS),如何選擇樹脂?

如果是合成C端是羧酸多肽以選擇Wang Resin, 如果是合成C端是酰胺多肽可以擇Rink Amide AM Resin或Rink Amide MBHA Resin. 如果是合成全保護(hù)多肽的可以選擇2-Cl Trt Resin.


帶Fmoc保護(hù)氨基酸樹脂Loading的計(jì)算方法有哪些?

計(jì)算Fmoc保護(hù)氨基酸樹脂Loading通常有二種,一種是增重法,增加的重量除以增加的分子量再除以樹脂總的重量. 另外一種是通過紫外分析,目前本公司提供的都是紫外分析的Loading值.


熒光修飾中,在C端修飾時(shí)候的方式有哪些?

通常熒光染料化合物帶有羧酸或者NHS活化酯,所以與多肽接合時(shí)需要多肽有氨基官能團(tuán),所以通過在序列中可以修飾在Lys側(cè)連氨基上,在C端時(shí)需要增加Lys或通過乙二胺(ED:NH2CH2CH2NH2)連進(jìn)行連接。如Lys(Biotin),ED-Biotin,EDDnp等。


請介紹一下Maps修飾的多肽情況?

Maps是多重抗原多肽,是將線型多肽的C端連接在二個(gè),四個(gè)等Lys上形成的分枝多肽,從而增大了整個(gè)分子的大小,通常有2支,4支,8支結(jié)構(gòu)。合成Maps多肽時(shí)由于縮合時(shí)的不均一性,多肽產(chǎn)物與非目標(biāo)肽性質(zhì)相似,因而很難除HPLC純化也很難提供質(zhì)譜鑒定。建議進(jìn)行氨基酸組分分析。


多肽PEG修飾有哪些作用?

PEG修飾劑又稱聚乙二醇修飾劑,修飾性PEG,PEG修飾劑等。是帶有官能團(tuán)的聚乙二醇,目前主要用于蛋白質(zhì)藥物修飾,以增加體內(nèi)半衰期,降低免疫原性,同時(shí)還可以增加藥物的水溶性。近幾年來修飾性PEG在制藥研發(fā)中應(yīng)用廣泛,在藥物藥效緩釋中起到重要作用。


多肽PEG修飾有哪些方法?

PEG修飾劑常見的修飾基團(tuán)大致可總結(jié)如下:氨基(-Amine)-NH2,氨甲基-CH2-NH2,馬來酰亞胺-Mal,羧基-COOH,巰基(-Thiol)-SH,琥珀酰亞胺碳酸酯-SC,琥珀酰亞胺乙酸酯-SCM,琥珀酰亞胺丙酸酯-SPA,琥珀酰亞胺-NHS,丙酸基-CH2CH2COOH,醛基-CHO,丙烯酸基-Acrylate,丙烯酸基-AC,疊氮基-Azide,生物素基-Biotin,熒光素基-Fluorescein,戊二酸基-GA,酰肼基-Hydrazide,炔基-Alkyne等。PEG修飾劑常見分類:(1)直鏈PEG修飾劑:mPEG (2)雙官能團(tuán)修飾劑:HCOO-PEG-COOH,NH2-PEG-NH2,OH-PEG-COOH,OH-PEG-NH2,HCL·NH2-PEG-COOH,MAL-PEG-NHS, (3)根據(jù)分子量的大小又有2000,3000,5000,10000,20000等 所以在進(jìn)行PEG化修飾時(shí)需要確定PEG的種類,官能團(tuán)要求以及分子量大小范圍。


假二肽(Pseudoproline Dipeptides)可以幫助困難多肽的合成嗎?

是的,Pseudoproline Dipeptides可以在多肽縮合中,減少多肽的Alpha轉(zhuǎn)角以及Beta折疊空間結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生,使得多肽保持線性,有利于多肽的合成,提高多肽的粗品純度。Pseudoproline的結(jié)構(gòu)在多肽用TFA切割時(shí)同時(shí)會(huì)去掉,得到正常的多肽。Pseudoproline Dipeptides主要有Fmoc-AA-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH,F(xiàn)moc-AA-Thr(Psi(Me,Me)pro)-OH二大系列,AA代表氨基酸。如果有側(cè)連的,側(cè)連帶保護(hù)。如Fmoc-Ser(tBu)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH Fmoc-Asp(OtBu)-Thr(Psi(Me,Me)pro)-OH


TAT peptide是什么?

TAT peptide 序列為Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg (RKKRRORRR)可以攜帶多肽穿膜。


合肥肽庫生物科技可以提供哪些環(huán)肽?

環(huán)肽包括Cys-Cys之間形成的硫硫鍵(S-S),即氧化肽,可以提供一對S-S,二對S-S,三對S-S的多肽合成,也可以提供多肽分子間的氧化,包括同一條多肽間形成二聚體,二條不同多肽間的氧化等。另外也提供酰胺成環(huán),包括頭尾環(huán)肽,側(cè)連環(huán)肽等。也可以提供一些酯鍵,硫酯鍵等環(huán)肽的合成。


點(diǎn)擊化學(xué)(Click Peptide)有哪些修飾可以選擇?

點(diǎn)擊化學(xué)的代表反應(yīng)為銅催化的疊氮-炔基Husigen環(huán)加成反應(yīng)(Copper-Catalyzed Azide–Alkyne Cycloaddition)。點(diǎn)擊化學(xué)的概念對化學(xué)合成領(lǐng)域有很大的貢獻(xiàn),在藥物開發(fā)和生物醫(yī)用材料等的諸多領(lǐng)域中,它已經(jīng)成為目前最為有用和吸引人的合成理念之一。具體在多肽中應(yīng)用主要是在多肽中帶有疊氮基或炔基官能團(tuán),常用的化合物有以下幾種可以選擇。Fmoc - 4 – azidophenylalanine Fmoc - Phe(N3) - OH; Fmoc – Azidohomoalanine Fmoc - D – propargylglycine Fmoc - D - Pra - OH Fmoc - L - propargylglycine Fmoc - L - Pra - OH Fmoc - Lys(N3) – OH Fmoc - azidolysine; Fmoc - lys(azide); Azidoacetic acid 6-Azidohexanoic acid Propiolic acid


側(cè)鏈甲基修飾的氨基酸有哪些?

主要有Lys(Me), Lys(Me2), Lys(Me3) 以及Orn(Me), Orn(Me2), Orn(Me3),Arg(Me), Arg(Me2,Symetrical) , Arg(Me2,ASymetrical)


C端硫脂多肽應(yīng)用在哪里?

多肽C端硫酯修飾后可以應(yīng)用于Native chemical ligation反應(yīng),與另外一條N端為半胱氨酸的多肽在中性條件下發(fā)生化學(xué)選擇之硫酯轉(zhuǎn)移反應(yīng)(chemoselective transthioesterification),重排成酰胺鍵,實(shí)現(xiàn)二條多肽間的連接。可以應(yīng)用于長肽通過片段進(jìn)行連接。


多肽與其他化合物或者載體接合考慮的因素有哪些?

經(jīng)常有一些多肽需要與一些藥物或者特定功能的化合物進(jìn)行連接,或者要把多肽連接到某些載體上去,需要化學(xué)鍵進(jìn)行結(jié)合,一般多肽具有氨基或羧酸官能團(tuán)可以考慮下相應(yīng)的羧酸或氨基進(jìn)行縮合,另外一種選擇是通過巰基(thiol)與馬來酰亞胺(Maleimide)在PH 8的環(huán)境下連接。多肽中可以同過帶有Cys或者M(jìn)aleimide官能團(tuán)進(jìn)行修飾。Maleimide修飾通?梢赃x擇化合物3-Maleimidopropionic Acid (CAS 7423-55-4)實(shí)現(xiàn)。


多肽合成的基本原理?

多肽固相合成法是多肽合成化學(xué)的一個(gè)重大的突破。它的最大特點(diǎn)是不必純化中間產(chǎn)物,合成過程可以連續(xù)進(jìn)行,進(jìn)而為多肽合成的自動(dòng)化奠定了基礎(chǔ)。目前全自動(dòng)多肽的合成,基本都是固相合成。其基本過程如下:基于Fmoc化學(xué)合成,先將所要合成的目標(biāo)多肽的C-端氨基酸的羧基以共價(jià)鍵形式與一個(gè)不溶性的高分子樹脂相連,然后以這一氨基酸的氨基作為多肽合成的起點(diǎn),同其它的氨基酸已經(jīng)活化的羧基作用形成肽鍵,不斷重復(fù)這一過程,即可得到多肽。根據(jù)多肽的氨基酸組成不同,多肽后處理方式不同,純化方式也有差異。


抗原多肽的序列長度是多少才合適?
通常我們建議抗原多肽的序列長度在8-20個(gè)氨基酸殘基之間,如果太短,就有多肽太特殊、所產(chǎn)生的抗體與天然蛋白之間的親和力(結(jié)合能力)不夠強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn),同樣,如果序列長度超過20,將有可能引入二級(jí)結(jié)構(gòu),所產(chǎn)生的抗體失去特異性的可能,而且肽鏈越長,通常合成難度增大,不易獲得高純度的產(chǎn)品。

上篇: 多肽的結(jié)構(gòu)分析方法
下篇: 多肽固相合成中常用顯色劑的配制和使用方法
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