DABCYL/ EDANS，DABCYL/6-FAM，TAMRA/6-FAM，Abz/Tyr(3-NO2), Mca/Dnp
合肥肽庫(kù)生物科技可以提供一些穩(wěn)定同位素修飾的多肽，主要有N15, C13 以及D代修飾，由于穩(wěn)定同位素氨基酸原料都比較貴，建議選擇一些簡(jiǎn)單氨基酸進(jìn)行標(biāo)記，如Gly,Val,Phe,Leu,Ala等。
影響合成多肽穩(wěn)定性的因素包括脫酰胺、氧化、水解、二硫鍵錯(cuò)配、消旋、β-消除、聚集等，研究顯示合成多肽中最常見(jiàn)的降解產(chǎn)物是脫酰胺產(chǎn)物、氧化產(chǎn)物、水解產(chǎn)物。在組成多肽的各種氨基酸中，天冬酰胺、谷胺酰胺易于發(fā)生脫酰胺反應(yīng)（尤其是在pH值升高和高溫條件下）；甲硫氨酸、半胱氨酸、組氨酸、色氨酸、酪氨酸最易氧化，對(duì)光照也較為敏感；天冬氨酸參與形成的肽鏈較易斷裂，尤其是Asp-Pro和Asp-Gly肽鍵。由于一個(gè)多肽分子中通常會(huì)含有多種不穩(wěn)定性的氨基酸殘基或肽鍵，因此合成多肽可能的降解機(jī)制和降解產(chǎn)物較為復(fù)雜。而多肽的聚集主要是由于疏水作用引發(fā)的，盡管目前還很難準(zhǔn)確預(yù)測(cè)哪些多肽易發(fā)生聚集，但至少對(duì)于一些中長(zhǎng)肽而言需對(duì)可能存在聚合物進(jìn)行研究。
如果是合成C端是羧酸多肽以選擇Wang Resin, 如果是合成C端是酰胺多肽可以擇Rink Amide AM Resin或Rink Amide MBHA Resin. 如果是合成全保護(hù)多肽的可以選擇2-Cl Trt Resin.
計(jì)算Fmoc保護(hù)氨基酸樹(shù)脂Loading通常有二種,一種是增重法,增加的重量除以增加的分子量再除以樹(shù)脂總的重量. 另外一種是通過(guò)紫外分析,目前本公司提供的都是紫外分析的Loading值.
通常熒光染料化合物帶有羧酸或者NHS活化酯，所以與多肽接合時(shí)需要多肽有氨基官能團(tuán)，所以通過(guò)在序列中可以修飾在Lys側(cè)連氨基上，在C端時(shí)需要增加Lys或通過(guò)乙二胺（ED：NH2CH2CH2NH2）連進(jìn)行連接。如Lys（Biotin），ED-Biotin，EDDnp等。
Maps是多重抗原多肽，是將線型多肽的C端連接在二個(gè)，四個(gè)等Lys上形成的分枝多肽，從而增大了整個(gè)分子的大小，通常有2支，4支，8支結(jié)構(gòu)。合成Maps多肽時(shí)由于縮合時(shí)的不均一性，多肽產(chǎn)物與非目標(biāo)肽性質(zhì)相似，因而很難除HPLC純化也很難提供質(zhì)譜鑒定。建議進(jìn)行氨基酸組分分析。
PEG修飾劑又稱(chēng)聚乙二醇修飾劑，修飾性PEG，PEG修飾劑等。是帶有官能團(tuán)的聚乙二醇，目前主要用于蛋白質(zhì)藥物修飾，以增加體內(nèi)半衰期，降低免疫原性，同時(shí)還可以增加藥物的水溶性。近幾年來(lái)修飾性PEG在制藥研發(fā)中應(yīng)用廣泛，在藥物藥效緩釋中起到重要作用。
PEG修飾劑常見(jiàn)的修飾基團(tuán)大致可總結(jié)如下：氨基（-Amine）-NH2，氨甲基-CH2-NH2，馬來(lái)酰亞胺-Mal，羧基-COOH,巰基（-Thiol）-SH，琥珀酰亞胺碳酸酯-SC，琥珀酰亞胺乙酸酯-SCM，琥珀酰亞胺丙酸酯-SPA，琥珀酰亞胺-NHS，丙酸基-CH2CH2COOH，醛基-CHO，丙烯酸基-Acrylate，丙烯酸基-AC，疊氮基-Azide，生物素基-Biotin，熒光素基-Fluorescein，戊二酸基-GA，酰肼基-Hydrazide，炔基-Alkyne等。PEG修飾劑常見(jiàn)分類(lèi)：（1）直鏈PEG修飾劑：mPEG （2）雙官能團(tuán)修飾劑：HCOO-PEG-COOH，NH2-PEG-NH2，OH-PEG-COOH，OH-PEG-NH2，HCL·NH2-PEG-COOH，MAL－PEG－NHS， （3）根據(jù)分子量的大小又有2000，3000，5000，10000，20000等 所以在進(jìn)行PEG化修飾時(shí)需要確定PEG的種類(lèi)，官能團(tuán)要求以及分子量大小范圍。
是的，Pseudoproline Dipeptides可以在多肽縮合中，減少多肽的Alpha轉(zhuǎn)角以及Beta折疊空間結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生，使得多肽保持線性，有利于多肽的合成，提高多肽的粗品純度。Pseudoproline的結(jié)構(gòu)在多肽用TFA切割時(shí)同時(shí)會(huì)去掉，得到正常的多肽。Pseudoproline Dipeptides主要有Fmoc-AA-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH，F(xiàn)moc-AA-Thr(Psi(Me,Me)pro)-OH二大系列，AA代表氨基酸。如果有側(cè)連的，側(cè)連帶保護(hù)。如Fmoc-Ser(tBu)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH Fmoc-Asp(OtBu)-Thr(Psi(Me,Me)pro)-OH
TAT peptide 序列為T(mén)yr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg （RKKRRORRR）可以攜帶多肽穿膜。
環(huán)肽包括Cys-Cys之間形成的硫硫鍵（S-S），即氧化肽，可以提供一對(duì)S-S，二對(duì)S-S，三對(duì)S-S的多肽合成，也可以提供多肽分子間的氧化，包括同一條多肽間形成二聚體，二條不同多肽間的氧化等。另外也提供酰胺成環(huán)，包括頭尾環(huán)肽，側(cè)連環(huán)肽等。也可以提供一些酯鍵，硫酯鍵等環(huán)肽的合成。
點(diǎn)擊化學(xué)的代表反應(yīng)為銅催化的疊氮-炔基Husigen環(huán)加成反應(yīng)（Copper-Catalyzed Azide–Alkyne Cycloaddition）。點(diǎn)擊化學(xué)的概念對(duì)化學(xué)合成領(lǐng)域有很大的貢獻(xiàn)，在藥物開(kāi)發(fā)和生物醫(yī)用材料等的諸多領(lǐng)域中，它已經(jīng)成為目前最為有用和吸引人的合成理念之一。具體在多肽中應(yīng)用主要是在多肽中帶有疊氮基或炔基官能團(tuán)，常用的化合物有以下幾種可以選擇。Fmoc - 4 – azidophenylalanine Fmoc - Phe(N3) - OH; Fmoc – Azidohomoalanine Fmoc - D – propargylglycine Fmoc - D - Pra - OH Fmoc - L - propargylglycine Fmoc - L - Pra - OH Fmoc - Lys(N3) – OH Fmoc - azidolysine; Fmoc - lys(azide); Azidoacetic acid 6-Azidohexanoic acid Propiolic acid
主要有Lys(Me), Lys(Me2), Lys(Me3) 以及Orn(Me), Orn(Me2), Orn(Me3)，Arg(Me), Arg(Me2,Symetrical) , Arg(Me2,ASymetrical）
多肽C端硫酯修飾后可以應(yīng)用于Native chemical ligation反應(yīng)，與另外一條N端為半胱氨酸的多肽在中性條件下發(fā)生化學(xué)選擇之硫酯轉(zhuǎn)移反應(yīng)(chemoselective transthioesterification)，重排成酰胺鍵，實(shí)現(xiàn)二條多肽間的連接�？梢詰�(yīng)用于長(zhǎng)肽通過(guò)片段進(jìn)行連接。
經(jīng)常有一些多肽需要與一些藥物或者特定功能的化合物進(jìn)行連接，或者要把多肽連接到某些載體上去，需要化學(xué)鍵進(jìn)行結(jié)合，一般多肽具有氨基或羧酸官能團(tuán)可以考慮下相應(yīng)的羧酸或氨基進(jìn)行縮合，另外一種選擇是通過(guò)巰基（thiol）與馬來(lái)酰亞胺（Maleimide）在PH 8的環(huán)境下連接。多肽中可以同過(guò)帶有Cys或者M(jìn)aleimide官能團(tuán)進(jìn)行修飾。Maleimide修飾通常可以選擇化合物3-Maleimidopropionic Acid (CAS 7423-55-4)實(shí)現(xiàn)。
多肽固相合成法是多肽合成化學(xué)的一個(gè)重大的突破。它的最大特點(diǎn)是不必純化中間產(chǎn)物，合成過(guò)程可以連續(xù)進(jìn)行，進(jìn)而為多肽合成的自動(dòng)化奠定了基礎(chǔ)。目前全自動(dòng)多肽的合成，基本都是固相合成。其基本過(guò)程如下：基于Fmoc化學(xué)合成，先將所要合成的目標(biāo)多肽的C-端氨基酸的羧基以共價(jià)鍵形式與一個(gè)不溶性的高分子樹(shù)脂相連，然后以這一氨基酸的氨基作為多肽合成的起點(diǎn)，同其它的氨基酸已經(jīng)活化的羧基作用形成肽鍵，不斷重復(fù)這一過(guò)程，即可得到多肽。根據(jù)多肽的氨基酸組成不同，多肽后處理方式不同，純化方式也有差異。
