液相色譜的基本原理是依靠混合物所包含的不同組分在兩相中溶解、分配以及吸附等存在的差異，如果兩相處于相對運動狀態(tài)，讓各組分在兩相內(nèi)持續(xù)進行上述反應(yīng)之后實現(xiàn)有效分離，根據(jù)既定順序通過固定相流出，按照相應(yīng)的柱后檢測方式確保混合物內(nèi)不同組分實現(xiàn)有效分離，如圖1。在實踐工作中，兩相中必然存在一相處于固定狀態(tài)，通常稱之為固定相，即色譜柱，而另一相處于流動狀態(tài)，即流動柱，一般也能夠稱其為溶劑。液相色譜儀往往包含了高壓色譜泵、進樣器、色譜柱、柱溫箱以及檢測系統(tǒng)構(gòu)成。
2、高效液相色譜儀的故障分析
2.1 高壓輸液系統(tǒng)
（1）常見故障
高壓輸液系統(tǒng)一般來說包含了貯液器以及高壓泵等，這里的貯液器主要發(fā)揮出存儲流動相的功能，輸液管頂部位置配備了過濾器。貯液器以及流動相如果受到污染可能會導致過濾器出現(xiàn)堵塞問題，對流速穩(wěn)定性帶來影響，導致基線出現(xiàn)變化，同時在色譜圖中形成多余的峰。基線底值必然會提升，導致樣品內(nèi)低濃度組分難以有效檢測。高壓泵屬于HPLC系統(tǒng)持續(xù)穩(wěn)定運行的關(guān)鍵動力源，若其無法持續(xù)穩(wěn)定運行導致系統(tǒng)壓力出現(xiàn)較大范圍的波動，抽取流動量產(chǎn)生變化，很容易影響最終檢測結(jié)果。高壓泵常見故障表現(xiàn)為泵頭氣泡或者密封圈滲漏等。
（2）應(yīng)對措施
一是應(yīng)當確保貯液器定期進行清洗，可選擇酸、水等，再使用超純水復洗。如果貯液器屬于溶劑瓶，在實際應(yīng)用90天之后需要更換，防止微生物對檢測結(jié)果造成影響。二是應(yīng)當對流動相過濾器做到每月定期實施超聲波清洗，每年定期予以更換。三是配置流動相需要選擇HPLC級的試劑，如果使用其他級別的試劑要經(jīng)由0.45μm的過濾設(shè)備實施過濾。四是流動相正式使用之前需要通過超聲波脫氣15分鐘，同時在其中配備在線脫氣設(shè)備，能夠有效避免氣泡對檢測結(jié)果帶來的影響。儀器設(shè)備長期使用是導致密封圈滲漏的關(guān)鍵性因素，所以應(yīng)當在各次作業(yè)結(jié)束后選擇相應(yīng)的容積將泵內(nèi)的緩沖液進行全面清理，防止鹽析出后導致柱塞桿發(fā)生磨損。
2.2 進樣系統(tǒng)
（1）常見故障
進樣系統(tǒng)一般包括手動與自動兩個類型，目前來說較為普遍運用的六通閥屬于手動進樣器，不管二者屬于何種類型，在實際應(yīng)用中普遍發(fā)生的故障是進樣閥堵塞，從而導致系統(tǒng)壓力增加，接頭滲漏對進樣量的準確性帶來影響。
（2）應(yīng)對措施
對進樣離心系統(tǒng)故障予以解決時，應(yīng)當對濾膜的相關(guān)樣品部件實施科學處理，對離心系統(tǒng)進行處理時應(yīng)當對高速濾膜離心機閘閥實施有效過濾，在確保這一作業(yè)有效完成后，再實施通過濾膜的操作，要確保這一過程的持續(xù)穩(wěn)定進行，應(yīng)當對0.45um的高速濾膜閘閥予以全面過濾，讓這一閘閥的濾膜在實際應(yīng)用的過程中可以獲得準確的增加速度。除此之外，為避免進樣色譜系統(tǒng)流動狀態(tài)下形成較多緩沖性含鹽，在日常使用液相色譜儀之后應(yīng)當?shù)谝粫r間通過有效策略對其中各個部件實施反復清洗，洗針也能夠有效避免出現(xiàn)樣品殘留。
2.3 檢測系統(tǒng)
（1）常見故障
檢測器一般來說可以把樣品濃度轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枺趯嶋H作業(yè)中較為普遍的一種便是紫外檢測器，但其可能存在的故障集中在基線噪聲、飄移以及燈故障上。
（2）應(yīng)對措施
針對基線噪聲問題來說，首先需要對電壓情況進行全面檢測，確保工作站和檢測器信號輸出有效接觸；其次確保采用HPLC級容器；最后要對檢測池進行全方位檢測，確保不存在氣泡，保持高壓泵的持續(xù)可靠運行。針對基線飄移問題來說，首先要仔細察看貯液瓶的情況；其次應(yīng)當避免檢測器溫度不存在較大程度的變化；最后要觀察檢測器與色譜柱是否受到污染。而對于燈故障來說，通常所選擇的處理方式是直接進行更換。
2.4 分離系統(tǒng)
（1）常見故障
分離系統(tǒng)屬于高效液相色譜儀的關(guān)鍵部件之一，柱壓以及柱效參數(shù)會在很大程度上決定其運行壽命，如果色譜柱的柱壓超過或低于標準值，在實際使用過程中很容易導致檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差，該色譜柱應(yīng)當及時報廢處理。
（2）應(yīng)對措施
在處理分離系統(tǒng)故障問題的過程中應(yīng)選擇如下措施：
首先，在色譜柱pH規(guī)定值之內(nèi)科學調(diào)控流動相的pH值；其次，選擇色譜純試劑以及超純水，進行樣品分析之前經(jīng)由針筒實施過濾，選擇0.45um濾膜，流動相以及樣品內(nèi)所包含的固體顆粒網(wǎng)常常會導致色譜柱出現(xiàn)堵塞問題，導致柱壓增加；再次，借助在線過濾器以及保護柱，因為流動相以及樣品過濾后不能夠確保固體顆粒物百分百清除，如果進入色譜柱之后很容易導致柱壓增加，因此需要予以充分重視；最后，應(yīng)當選擇強溶劑對色譜柱實施全方位清洗，在實際使用之后可以選擇緩沖鹽對流動相進行清理，再選擇乙腈或者甲醇實施清洗。
2.5 峰拖尾
（1）常見故障
在高效色相色譜儀的實際使用時，色譜圖可能產(chǎn)生峰拖尾的現(xiàn)象，該問題產(chǎn)生的原因一般是受到柱效降低或峰干擾的問題，在很大程度上降低了最終檢測結(jié)果的準確性，導致色譜儀難以持續(xù)穩(wěn)定運行。
（2）應(yīng)對措施
針對上述問題，可以選擇如下解決策略：一是對柱進行更換，盡可能避免讓其處于低腐蝕環(huán)境下。二是應(yīng)當適當降低連接點，對連接點予以優(yōu)化調(diào)整。三是在弱腐環(huán)境下對色譜柱實施更換。四是安裝在線過濾器，對燒結(jié)不銹鋼予以更換。五是減少流動相pH值，通過增加堿或三乙胺純化柱的方式提高緩沖液濃度。六是提高柱直徑，減少樣品數(shù)量，選擇高容量固定相。
3、對高效液相色譜儀的日常維護
3.1 高效液相色譜儀開機以及關(guān)機時的注意事項
在做好分析準備工作后，需依次將穩(wěn)壓電源、高壓輸液泵、柱溫箱、檢測器等打開，而在完成以上各部件的自檢后，再把和儀器相連的電腦打開，讓相應(yīng)的工作軟件處于運行狀態(tài)。結(jié)束分析后，需先將工作軟件關(guān)閉，再按照打開時相反的順序關(guān)閉各部件。
3.2 對于流動相的要求
一般情況下，高效液相色譜儀所采用的流動相均為有機溶劑與水，且沸點也比較低，當然也可能是緩沖溶液的混合物。為了能夠正常使用此儀器，要求全部的流動相一定要是色譜純級的，且在過濾了雜質(zhì)和將氣泡排除后，方可以干凈地貯存瓶中對其予以儲存。
（1）針對流動相的物理性能要求。
對分析物的溶解能力要強，如此可將檢驗精密度提高；且還需有較小的黏度，保證柱降壓在合理范圍內(nèi)；同時沸點也不能高，以便在制備分離過程中更好地回收樣品。
（2）流動相的過濾。
在使用前，應(yīng)借助0.45 μm（或0.22 μm）的水溶性濾膜來過濾全部的流動相，以將其中的雜質(zhì)微粒去掉。
（3）對流動相進行脫氣。
流動相使用之前一定要做脫氣處理，不然便極易導致氣泡出現(xiàn)在系統(tǒng)內(nèi)，破壞泵的工作和基線的穩(wěn)定性。
常用脫氣方法包括：
第一，在線真空脫氣法。
該法即在儲液系統(tǒng)中串聯(lián)真空脫氣裝置，并聯(lián)系起膜過濾器，讓流動相在脫氣后再進入輸液泵。此種方法具有理想效果，且對于多元溶劑體系較為適用。
第二，超聲脫氣法。
此法多用于實驗室中，即在超聲波水浴中同時放入完成配置的 流動相和容器，接受15~30min超聲。
第三，抽真空脫氣法。
利用微型真空泵降壓至0.05~0.07 MPa，并把所溶解的氣體B1除去。因為抽真空會改變混合溶劑組成，所以在對多元溶劑混合之前，需先對其進行脫氣，確保不會改變混合后的組分。
3.3 泵的維護
堅決不允許在泵內(nèi)留存含有緩沖鹽的流動相，特別是在停泵過夜或時間更長的情況下。在完成分析檢測后，應(yīng)以純水沖洗泵，再采用相應(yīng)溶劑予以清洗。一般可通過甲醇或甲醇與水的混合溶液來清洗反相鍵合固定相。如果有流動相做緩沖鹽，則在緩沖鹽和有機溶劑交換前，需以2%甲醇水溶液清洗泵，防止結(jié)晶形成于有機相的鹽中，損壞泵的各個組件。
4、結(jié)語
不論是在工業(yè)生產(chǎn)，還是科研學習中，高效液相色譜儀均發(fā)揮了重要作用，而要想讓儀器得到有效利用，必須在高效利用的同時，將經(jīng)驗與歷史數(shù)據(jù)聯(lián)系起來對其展開良好維護。借助分析、排除故障，可知曉使用前的檢測與使用后的沖洗流路環(huán)節(jié)是不可缺少的，確保儀器能夠長時間使用的關(guān)鍵就是保持儀器部件干凈，未被灰塵污染。對此，要求使用者在使用時養(yǎng)成正確習慣，在操作過程中嚴格遵循相關(guān)規(guī)程，第一時間對一些關(guān)鍵部件予以檢查維護，包括泵、色譜柱、檢測池等，如此方可在試驗過程中將故障及時排除和解決，讓儀器能夠被更長久的使用，促進數(shù)據(jù)準確性、穩(wěn)定性的顯著提升。
