摘要:腫瘤的發(fā)病率在逐年增長,其中惡性腫瘤嚴(yán)重影響著人類的健康和生命。目前,臨床上常規(guī)抗癌藥物由于存在靶向性較低、毒副作用明顯、容易產(chǎn)生耐藥性等缺點,正在失去其一些治療用途。而抗腫瘤多肽類藥物擁有分子量小、靶向性強、特異性高、毒性弱、易于合成等特點,使其成為了治療腫瘤的新方法?鼓[瘤多肽主要包括天然多肽、人工修飾多肽及人工合成多肽,其作用機制非常復(fù)雜,主要包括抑制腫瘤細胞增殖、遷移和侵襲,促腫瘤細胞凋亡,免疫調(diào)節(jié)等。該文從多肽通過阻斷蛋白質(zhì)相互作用發(fā)揮抗腫瘤作用這一機制進行概述。
惡性腫瘤是臨床上常見的導(dǎo)致患者死亡的原因,目前癌癥治療包括手術(shù)、化療、放療、生物、激素治療等。然而,這些治療主要存在的問題是其昂貴的成本和副作用[1]。抗腫瘤肽因其具有多種優(yōu)勢而得到了廣泛開發(fā)和應(yīng)用。目前,從植物、動物及微生物中分離出了多種抗腫瘤活性肽,如罌粟花粉中分離的十三肽能夠抑制肝癌及乳腺癌細胞的增殖。茜草科植物寒丁子中分離的多肽RA-VⅡ具有抗腫瘤活性,在日本作為抗癌藥已經(jīng)進入臨床I期[2-3]。許多動物來源的多肽也具有很好的抗腫瘤活性,特別是海洋動物。如海綿和海鞘等的次生代謝產(chǎn)物,因其含有一些特殊的氨基酸,具有抗腫瘤活性[4]。除了天然的活性多肽,利用噬菌體展示技術(shù)及化學(xué)合成的多種多肽都被報道具有抗腫瘤作用[5]。多肽藥物具有多種優(yōu)勢,如免疫原性低、受體結(jié)合率高、制備成本低且易于改造和聯(lián)合應(yīng)用等,同時抗腫瘤肽又能通過多種機制發(fā)揮作用,如抑制腫瘤細胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡、促進腫瘤細胞壞死、抑制微管合成等[6-8]。目前,一種新的多肽藥物研發(fā)策略是阻斷蛋白質(zhì)相互作用。因為大部分的蛋白質(zhì)都是和伴侶分子一起作用或是與其他蛋白質(zhì)形成復(fù)合物來發(fā)揮作用的。蛋白質(zhì)相互作用幾乎在整個細胞生命活動過程中發(fā)揮功能,如DNA合成、蛋白質(zhì)翻譯、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程等,蛋白質(zhì)相互作用構(gòu)成了細胞生命活動及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子網(wǎng)絡(luò)。蛋白質(zhì)相互作用異常導(dǎo)致基因表達異常、蛋白質(zhì)功能異常及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常,是多種疾病的發(fā)病基礎(chǔ)。因此,蛋白質(zhì)相互作用已成為多種疾病治療的潛在靶點[9-10]。在腫瘤發(fā)生發(fā)展中,有很多經(jīng)典的蛋白質(zhì)相互作用發(fā)揮了重要作用,基于阻斷這些蛋白質(zhì)相互作用的抗腫瘤多肽已經(jīng)取得了極大的研究進展。
1 阻斷P53-MDM2相互作用抗腫瘤肽
P53是一個重要的抑癌基因,參與多種細胞生命活動,如基因轉(zhuǎn)錄、DNA損傷修復(fù)、細胞衰老及凋亡等。大約50%的腫瘤中,P53基因發(fā)生了突變或缺失,從而失去了對細胞生長、凋亡及DNA修復(fù)的調(diào)控[11]。泛素化E3連接酶MDM2是P53最主要的負調(diào)控因子,通過N端與P53相互作用,使P53泛素化降解。目前,抑制P53-MDM2相互作用的一些小分子抑制劑,如Nutlins、MI-219,通過靶向MDM2 N端的P53結(jié)合位點,維持P53的穩(wěn)定并激活P53信號通路,發(fā)揮了較好的抗腫瘤作用[12]。除此之外,基于阻斷P53-MDM2相互作用的抗腫瘤肽也得到了開發(fā)。PAZGIER等[13]利用噬菌體展示技術(shù)篩選到溶解度高且特異性強的抑制P53-MDM2相互作用的多肽PMI(TSFAEYWNLLSP)。LIU等[14]利用鏡像噬菌體展示技術(shù)(Mirror imagephage display)篩選出與MDM2分子鏡像對映體相互作用的L-peptide配體,之后通過固相合成等手段合成出與篩選出來的L-peptide配體鏡像對應(yīng)的D-peptide配體、DPMI-γ(DWWPLAFEALLR),D-peptide對目標(biāo)分子的親和力與其對應(yīng)篩選出的L-peptide與目標(biāo)分子的親和力相同,但可以抵抗蛋白酶降解。這些多肽都能夠阻斷P53-MDM2相互作用,促進P53依賴的細胞死亡途徑有效激活,發(fā)揮抗腫瘤作用。
2 抗腫瘤肽靶向EGF,阻斷EGF-EGFR相互作用
表皮生長因子受體(EGFR或Her1 / ErbB1)是ErbB細胞膜受體家族的4個成員之一,EGFR廣泛分布于哺乳動物細胞表面,通過其細胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合配體發(fā)生構(gòu)象變化,導(dǎo)致同型或異型寡聚化而被激活,從而參與細胞的增殖和分化[15]。表皮生長因子EGF是一種包含53個氨基酸的小肽,是EGFR的配體,通過與EGFR的特異性結(jié)合,并通過促進EGFR的二聚化和自磷酸化來啟動一系列信號級聯(lián)反應(yīng)促進細胞增殖,如MAPK、Akt、JNK信號通路等。相關(guān)報道表明已在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)EGF和EGFR的異常表達及EGFR的突變,導(dǎo)致EGFR信號途徑過度激活。EGFR與腫瘤細胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān),是腫瘤化療的重要靶點[16-17]。目前,針對EGFR的藥物有西妥昔單抗和帕尼單抗,通過與EGFR胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合從而阻斷EGFR激活;以及小分子藥物吉非替尼和厄洛替尼,通過阻斷EGFR的自磷酸化從而阻斷下游的致癌途徑[18]。但是這些針對EGFR的藥物最大的問題是其副作用和產(chǎn)生的耐藥性。GUARDIOLA等[19]利用分子對接技術(shù)和EGFR受體熱點模擬技術(shù)設(shè)計并合成了一條EGF結(jié)合肽cp28(CQGTSNKLTQLGTFEDHFLSLQRMEFNNC),該多肽能夠與EGF結(jié)合從而阻斷EGFR與EGF的相互作用,并抑制乳腺癌細胞的增殖。這一研究為小分子蛋白的藥物多肽開發(fā)提供了基礎(chǔ)。
3 阻斷PD-1/PD-L1相互作用的腫瘤免疫治療肽
腫瘤免疫治療是一種新的腫瘤治療方法。目前,主要是通過抑制免疫檢查點來治療,其中較為有代表性的就是CTLA-4 拮抗劑和PD-1/PD-L1抑制劑。CTLA-4是首個被發(fā)現(xiàn)的“免疫檢查點”,而PD-1/PD-L1被認(rèn)為是目前腫瘤免疫治療最有希望的重要靶點。程序性細胞死亡受體1(PD-1)是一種在免疫細胞上表達的重要的免疫抑制分子,通過向下調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)對人體細胞的反應(yīng),以及通過抑制T細胞炎癥活動來調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)并促進自身耐受。PD-L1是PD-1的配體之一,在多種腫瘤細胞中過表達。PD-L1與PD-1的結(jié)合導(dǎo)致T細胞免疫抑制的激活,并誘導(dǎo)T細胞凋亡,使腫瘤細胞開啟免疫逃逸[20-21]。目前,靶向PD-1/PD-L1免疫檢查點的藥物通過阻斷腫瘤細胞和T細胞結(jié)合,使T細胞能正常發(fā)揮作用,持續(xù)識別腫瘤細胞并清除。針對PD-1批準(zhǔn)上市的單克隆抗體藥有Nivolumab和Pembrolizumab,適用于黑色素瘤、非小細胞肺癌、頭頸鱗狀細胞癌等。而PD-L1的單克隆抗體抑制劑Atezolizumab、Durvalumab及Avelumab也已經(jīng)被批準(zhǔn)上市。盡管這些針對免疫抑制檢查點的抗體藥對部分腫瘤具有一定的療效,但隨后產(chǎn)生的耐藥性,及其高成本對免疫治療這一新興療法提出了挑戰(zhàn)。LI等[22]通過細菌表面展示技術(shù),篩選到了具有高親和力且特異性結(jié)合PD-L1的多肽TPP-1(SGQYASYHCWCWRDPGRSGGSK),TPP-1多肽能夠阻斷PD-1/PD-L1相互作用,并使T細胞活化,體外裸鼠致瘤實驗表明該多肽具有抗腫瘤效應(yīng)。LIU等[23]利用噬菌體展示技術(shù)結(jié)合一種新的生物篩選程序得到了能夠特異性結(jié)合PD-L1的CLP002肽(WHRSYYTWNLNT),該肽能夠特異性地結(jié)合PD-L1與PD-1相互作用的殘基,并阻斷PD-1/PD-L1在腫瘤細胞中的相互作用,從而激活T細胞發(fā)揮抗癌作用。
4 靶向Bcl2-BH 結(jié)構(gòu)域,誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡多肽
Bcl-2是凋亡調(diào)節(jié)蛋白家族中起關(guān)鍵作用的成員,通過與其他凋亡蛋白相互作用,發(fā)揮細胞凋亡主開關(guān)的作用。Bcl-2家族包括抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白兩大類。Bcl-2蛋白具有4個BH結(jié)構(gòu)域(BH1-4),這是大多數(shù)抗凋亡家族成員所特有的,而促凋亡家族成員僅具有BH1-3結(jié)構(gòu)域(例如Bax和Bak)。另外一些促凋亡蛋白,如Bim則僅具有BH3結(jié)構(gòu)域,充當(dāng)激活Bax或Bak的前哨,進而通過透化線粒體外膜并釋放細胞色素c觸發(fā)細胞凋亡。Bcl-2通過結(jié)合這些促凋亡蛋白的BH3結(jié)構(gòu)域形成異源二聚體,從而抑制細胞凋亡。Bcl-2蛋白在多種腫瘤中被發(fā)現(xiàn)表達升高,從而增加了腫瘤細胞的凋亡抗性[24-25]。目前,針對Bcl-2蛋白的癌癥治療藥物主要是模擬BH3結(jié)構(gòu)域的小分子藥物,如ABT-737、ABT-263(Navitoclax)和ABT-199(Venetoclax),通過競爭性地抑制Bcl-2與促凋亡蛋白BH3結(jié)構(gòu)域的結(jié)合,從而誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡[26]。除此之外,來源于促凋亡蛋白Bax、Bad、Bim等的BH3結(jié)構(gòu)域的抗腫瘤多肽得到了大量的開發(fā)。除此之外,最新研究還開發(fā)了針對Bcl-2的BH4結(jié)構(gòu)域的多肽來誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡。Bcl-2能夠通過其BH4結(jié)構(gòu)域與肌醇1,4,5-三磷酸受體(IP3R)結(jié)合,抑制細胞內(nèi)鈣離子濃度升高而發(fā)揮抗凋亡的作用。LAVIK等[27]合成了阻斷Bcl-2與IP3R相互作用的多肽BIRD-2(RKKRRQRRRGGNVYTEIKCNSLLPLAAIVRV),能夠誘導(dǎo)多種淋巴瘤細胞的凋亡,而且聯(lián)合模擬BH3結(jié)構(gòu)域的小分子藥物ABT-263和ABT-199,腫瘤細胞凋亡效果更加明顯。
5 抑制離子通道活化的抗腫瘤肽
鈣庫調(diào)控的鈣通道Orai1與多種腫瘤密切相關(guān),如乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等。在腫瘤細胞內(nèi),Orai1蛋白的表達量明顯上調(diào),鈣電流升高,鈣信號被異常激活,促進腫瘤細胞的侵襲遷移,影響細胞增殖,增加腫瘤血管生成。Orai1鈣通道的激活依賴于與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)跨膜蛋白STIM1的相互作用。鈣離子信號與腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),Orai1已經(jīng)成為治療腫瘤的新的有效靶點[28]。但是,目前研究使用的Orai1鈣通道抑制劑,如2-APB和SKF-96365,并沒有特異性,在抑制Orai通道的同時,也會抑制其他一些鈣通道。我們課題組合成了與STIM1相互作用區(qū)域的Orai3-CT多肽,并偶聯(lián)了細胞穿透肽TAT,成功將TAT-Orai3CT多肽(YGRKKRRQRRRGGRSLVAHKTDRYKQELEELNRLQGELQAV)導(dǎo)入乳腺癌細胞內(nèi),并阻斷了Orai1與STIM1的相互作用,抑制了細胞內(nèi)的鈣內(nèi)流,而且有效抑制了乳腺癌細胞的增殖[29]。
6 展望
目前,蛋白質(zhì)相互作用已經(jīng)成為了重要的抗腫瘤靶點,通過阻斷蛋白質(zhì)相互作用從而抑制相關(guān)受體的過度激活、促進免疫細胞活化以及誘導(dǎo)細胞凋亡等,給腫瘤帶來了新的治療策略。很多針對蛋白質(zhì)相互作用開發(fā)的小分子藥物取得了較好的療效,但特異性差及耐藥性是其主要問題。另外針對蛋白質(zhì)相互作用開發(fā)的單克隆抗體應(yīng)用到了臨床,但成本太高,其次開發(fā)難度大,很多蛋白質(zhì)相互作用的表面比較大而且相對平坦,并沒有很好的抗體結(jié)合區(qū)域,因此這是單克隆抗體藥物開發(fā)的局限性,而小分子多肽則具有很大的優(yōu)勢[30]。首先,針對蛋白質(zhì)相互作用位點合成的多肽已被證明能夠有效阻斷蛋白質(zhì)相互作用,發(fā)揮抗腫瘤作用;其次,抗腫瘤肽分子量小,易于侵入腫瘤細胞;再次,抗腫瘤肽易于合成,成本低,且免疫原性低,副作用小;最后,抗腫瘤肽靶向性好,而且可以通過納米藥物傳輸系統(tǒng)進行靶向釋放。但小分子多肽的主要缺陷是其不穩(wěn)定性,易于降解。針對這一問題有兩種策略能夠提高多肽的構(gòu)象穩(wěn)定性。一種是通過環(huán)化作用,多肽可形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)、“訂書釘”肽等新的更加穩(wěn)定的構(gòu)象,另一種是通過修飾作用,將多肽鏈中參入D型氨基酸或者β氨基酸分別合成D型多肽和β型多肽,也可將多肽側(cè)鏈與氮原子相連,形成類肽。這些修飾的多肽能夠更加穩(wěn)定且有效地阻斷重要蛋白之間的相互作用,從而發(fā)揮更好的抗腫瘤作用[31]?傊,基于阻斷蛋白質(zhì)相互作用的抗腫瘤肽以其獨有的優(yōu)勢在腫瘤治療中具有廣闊的前景。
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