摘要：癌癥進(jìn)展的標(biāo)志是免疫抑制細(xì)胞的浸潤(rùn)，如腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tam)、調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(Tregs)和髓源性抑制細(xì)胞(MDSCs)。這些細(xì)胞在消除細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的(CTL)免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，使腫瘤生長(zhǎng)繼續(xù)不減弱。此外，通過使用肽和基于肽的納米藥物靶向這些免疫抑制細(xì)胞已顯示出有希望的結(jié)果。在這里，我們回顧了免疫抑制細(xì)胞在癌癥進(jìn)展中的起源和功能，用于其靶向的基于肽的系統(tǒng)，并探討了癌癥免疫治療的未來研究途徑。這些研究的成功證明了腫瘤免疫微環(huán)境在癌癥傳播中的重要性，以及肽基納米材料作為免疫調(diào)節(jié)劑的潛力。
1 介紹
癌癥是全球主要死亡原因，2018 年估計(jì)有 960 萬人死亡[1]。該疾病的致死率部分歸因于免疫來源的免疫抑制細(xì)胞（如腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 (TAM)、調(diào)節(jié)性 T 淋巴細(xì)胞 (Treg) 和髓源性抑制細(xì)胞 (MDSC)）進(jìn)入腫瘤微環(huán)境 (TME)。這些細(xì)胞進(jìn)入 TME 與多種癌癥（如皮膚癌、前列腺癌、肺癌和卵巢癌）患者的不良預(yù)后有關(guān) [2–10]這些細(xì)胞通過抑制人體的腫瘤殺傷免疫反應(yīng)，即 CD8 +細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞 (CTL)，來支持癌癥進(jìn)展，這種免疫抑制主要通過免疫檢查點(diǎn)分子的表達(dá)以及抗炎細(xì)胞因子的分泌來介導(dǎo)。11例如，程序性死亡配體 1 (PD-L1) 和 CD80/CD86 在 TAM 表面表達(dá)，并分別與免疫檢查點(diǎn)程序性死亡蛋白 1 (PD-1) 和細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白 4 (CTLA-4) 相互作用，后者存在于活化的 CTL 表面，并削弱其效力和增殖[12]。
1.1 CTL 簡(jiǎn)介
CTL 是適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的主要組成部分，與 B 淋巴細(xì)胞一起。與構(gòu)成先天免疫系統(tǒng)的自然殺傷 (NK) 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞 (DC) 不同，CTL 必須先針對(duì)特定抗原進(jìn)行啟動(dòng)和擴(kuò)增，然后才能表現(xiàn)出細(xì)胞毒性。腫瘤相關(guān)抗原 (TAA) 是短肽序列（約 8-11 個(gè)氨基酸），由抗原呈遞細(xì)胞 (APC) 從癌細(xì)胞中清除，然后抗原呈遞細(xì)胞將這些肽呈遞到稱為主要組織相容性復(fù)合體 (MHC) 的表面蛋白復(fù)合物上 [13]。載有抗原的 MHC 用于通過 T 細(xì)胞受體 (TCR) 激活幼稚 CTL，使其對(duì)所呈遞的抗原產(chǎn)生特異性反應(yīng)。CTL 的激活以共刺激方式發(fā)生，取決于 MHC 同時(shí)激活 TCR，以及 APC 表達(dá)的 CD80/CD86 激活另一種表面蛋白 CD28。激活后，CTL 在 IL-2 存在下進(jìn)行克隆擴(kuò)增，并對(duì)表達(dá)抗原的細(xì)胞表現(xiàn)出細(xì)胞毒性。CTL 的細(xì)胞毒性效應(yīng)功能由細(xì)胞毒素（如顆粒酶、穿孔素和顆粒溶素）的釋放介導(dǎo)，這些毒素會(huì)誘導(dǎo)靶細(xì)胞中的孔形成和膜溶解[14]。此外，CTL 可通過表達(dá) FAS（FS-7 相關(guān)表面抗原）死亡配體，通過細(xì)胞間接觸直接誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。激活后，CTL 表現(xiàn)出 CD28 表達(dá)下調(diào)和 PD-1 和 CTLA-4 等免疫檢查點(diǎn)表達(dá)上調(diào)。這些檢查點(diǎn)與巨噬細(xì)胞、DC、Treg 和癌細(xì)胞上表達(dá)的相關(guān)配體（分別為 PD-L1 和 CD80/CD86）相互作用，可通過削弱 CTL 的效應(yīng)功能和增殖來阻止免疫反應(yīng)。由于 CTL 構(gòu)成了適應(yīng)性免疫反應(yīng)的大部分，因此重新刺激 CTL 介導(dǎo)的腫瘤免疫一直是癌癥免疫治療領(lǐng)域的主要關(guān)注點(diǎn)。
1.2 當(dāng)前的免疫治療策略
免疫療法的發(fā)展是為了刺激癌癥中被抑制的 CTL。盡管癌癥驅(qū)動(dòng)的免疫抑制背后的機(jī)制最近才被發(fā)現(xiàn)，但早在 19 世紀(jì)，免疫刺激和治療之間的聯(lián)系就已被經(jīng)驗(yàn)性地觀察到。第一項(xiàng)記錄這一概念的研究發(fā)生在 1868 年，由 Wilhelm Busch 進(jìn)行，他在研究中觀察到，在細(xì)菌感染介導(dǎo)的腫瘤消退后，化膿性鏈球菌[15],25年后，威廉·科利發(fā)表了一份報(bào)告，證實(shí)了細(xì)菌感染在10例不同患者身上治療癌癥的療效。[16]。一種含有該菌株的細(xì)菌疫苗被命名為“科利毒素”，以紀(jì)念他的工作，并被用作抗癌藥物數(shù)十年[17],直到 20 世紀(jì) 90 年代，免疫學(xué)的進(jìn)步確定了免疫細(xì)胞在控制癌癥生長(zhǎng)中的關(guān)鍵作用，免疫療法的概念才被擱置，取而代之的是小分子細(xì)胞周期抑制劑和放射療法。[18–20]。
單克隆抗體作為免疫檢查點(diǎn)抑制劑的應(yīng)用涵蓋了大多數(shù)免疫療法，首次成功的臨床前應(yīng)用是在 1996 年由 Allison 等人報(bào)道的。[21],2010 年發(fā)表了一項(xiàng)利用 CTLA-4 靶向單克隆抗體（伊匹單抗）的臨床試驗(yàn)結(jié)果，結(jié)果顯示，與標(biāo)準(zhǔn)治療 gp100 肽疫苗相比，轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者的生存期有所改善（10.1 個(gè)月 vs. 6.4 個(gè)月）[22],這些結(jié)果促使伊匹單抗于次年獲得 FDA 批準(zhǔn)，商品名為 Yervoy，用于治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤。[23]。不久之后，F(xiàn)DA 還批準(zhǔn)了兩種 PD-1 免疫檢查點(diǎn)抑制劑，派姆單抗/蘭布羅利珠單抗（Keytruda）和納武單抗（Opdivo），用于治療黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌和腎細(xì)胞癌[24，25],此外，抗 PD-L1 單克隆抗體阿特珠單抗 (Tecentriq) 于 2016 年獲批用于治療膀胱癌，并于 2019 年再次獲批用于治療小細(xì)胞肺癌和三陰性乳腺癌[26] 值得注意的是，2018 年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)被授予 Allison 和 Honjo，他們首次證明了 CTLA-4 和 PD-1 免疫療法的有效性[27，28]。
免疫檢查點(diǎn)抑制劑通過防止免疫反應(yīng)過早關(guān)閉而發(fā)揮作用，而其他免疫療法則側(cè)重于協(xié)助啟動(dòng) CTL 以產(chǎn)生更大的免疫反應(yīng)。肽疫苗已在臨床前模型和臨床試驗(yàn)中得到探索 [29–31],肽疫苗的目的是合成與癌細(xì)胞上呈現(xiàn)的TAA相同的肽序列，并將其遞送至CTL，以增加其對(duì)表達(dá)這些抗原的癌細(xì)胞的激活和啟動(dòng)。這一概念可以推廣到體外設(shè)計(jì)表達(dá)具有抗原結(jié)合和T細(xì)胞活化部分的嵌合抗原受體（CAR）的CTL（CAR-T細(xì)胞）[32],CAR-T 細(xì)胞是通過過繼細(xì)胞轉(zhuǎn)移產(chǎn)生的，即從患者體內(nèi)提取自體的 T 淋巴細(xì)胞，對(duì)其進(jìn)行改造以表達(dá) CAR，針對(duì)患者特異性抗原進(jìn)行引發(fā)，在體外擴(kuò)增，然后重新引入患者體內(nèi)。[33，34]。
另一種有前景的免疫治療方法是將肽、單克隆抗體和核酸適體等治療劑靶向并遞送至免疫抑制的 TAM、Treg 和 MDSC。[38–41],尤其是肽類藥物，它是免疫療法的有力候選藥物，已用于針對(duì)免疫抑制細(xì)胞的各種研究，因?yàn)樗鼈兙哂性S多有吸引力的特性，如生物相容性、成本效益和多功能性，既可作為靶向部分，又可作為治療劑。然而，肽在體內(nèi)穩(wěn)定性較差，因?yàn)樗鼈內(nèi)菀妆谎搴徒M織中的蛋白酶降解，因此其應(yīng)用受到限制。納米顆粒系統(tǒng)通常用于規(guī)避這個(gè)問題，從而可以安全地將肽遞送到靶細(xì)胞。此外，即使這些小細(xì)胞群處于高度異質(zhì)的微環(huán)境中，也已使用對(duì)免疫抑制細(xì)胞具有特異性的肽功能化的納米顆粒來操縱它們。
這篇小型評(píng)論詳細(xì)介紹了與癌癥傳播有關(guān)的免疫抑制細(xì)胞的起源、生物標(biāo)志物和功能，然后強(qiáng)調(diào)了肽和肽功能化納米顆粒在靶向這些細(xì)胞以進(jìn)行免疫治療反應(yīng)中的應(yīng)用。我們引導(dǎo)讀者閱讀其他評(píng)論，這些評(píng)論廣泛描述了免疫治療的一般免疫療法和納米醫(yī)學(xué)策略.
2 癌癥中的免疫抑制細(xì)胞
浸潤(rùn)性免疫細(xì)胞（如 M2 樣 TAM、Treg 和 MDSC）在癌癥中發(fā)揮抑制作用，抑制 CTL 介導(dǎo)的腫瘤免疫。（圖 1)。M2 巨噬細(xì)胞和 Treg 的內(nèi)源性功能是在感染得到處理后停止免疫反應(yīng)，以及預(yù)防自身免疫。然而，在癌癥的背景下，這些細(xì)胞通過抑制 CTL 介導(dǎo)的對(duì)疾病的免疫反應(yīng)與疾病進(jìn)展有關(guān)。MDSC 是一種獨(dú)特的細(xì)胞亞群，僅在病理情況下觀察到，包括癌癥。TAM、Treg 和 MDSC 在癌癥進(jìn)展中的起源、標(biāo)記和作用將在下文進(jìn)一步討論。
2.1 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 (TAM)
巨噬細(xì)胞是一種免疫細(xì)胞，能夠吞噬異常細(xì)胞和外來入侵者，并呈遞抗原和分泌免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子。49單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞根據(jù)炎癥線索從血流中招募為未分化的單核細(xì)胞，例如 CCL2（或單核細(xì)胞趨化蛋白-1，MCP-1）、CCL3（或巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1a，MIP-1a）、CXCL12（或基質(zhì)衍生因子-1，SDF-1）和 CX3CL1（或分形因子）[50–55]。根據(jù)這些單核細(xì)胞滲出到的免疫學(xué)環(huán)境，它們可能分化為促炎性 M1 表型或抗炎性 M2 表型巨噬細(xì)胞。M1 巨噬細(xì)胞受脂多糖和 Th1 細(xì)胞因子（如干擾素γ (IFN-y) 和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子 (GM-CSF)）極化 [56它們與殺死病原體和釋放促炎細(xì)胞因子（TNF-α、CCL3、IL-6、IL-12）有關(guān)，從而使其具有殺腫瘤作用[57–59而 M2 巨噬細(xì)胞則由 Th2 細(xì)胞因子（如 IL-4 和 IL-13）激活。與細(xì)胞外基質(zhì)重塑以及抗炎和免疫抑制細(xì)胞因子分泌（IL-10、TGF-β）有關(guān)，有助于支持腫瘤的生長(zhǎng)[62]。由于 M1 和 M2 巨噬細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮不同的功能，因此可以通過評(píng)估代謝輸出來區(qū)分兩者。例如，巨噬細(xì)胞功能的差異在氨基酸精氨酸的代謝中得到了很好的體現(xiàn)。M1 巨噬細(xì)胞通過一氧化氮合酶代謝精氨酸產(chǎn)生一氧化氮，一氧化氮通過靶細(xì)胞膜擴(kuò)散并介導(dǎo)細(xì)胞毒性,另一方面，M2 巨噬細(xì)胞被觀察到利用精氨酸酶將精氨酸轉(zhuǎn)化為鳥氨酸，鳥氨酸是一種參與尿素循環(huán)的氨基酸，通過刺激基質(zhì)蛋白（如膠原蛋白）的生成來促進(jìn)細(xì)胞增殖和組織修復(fù)。TAM 通常屬于 M2 分類，在癌癥進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，因?yàn)樗鼈兣c不良的患者預(yù)后有關(guān),研究表明，TAM 向腫瘤和周圍微環(huán)境的浸潤(rùn)是由癌細(xì)胞的化學(xué)信號(hào)介導(dǎo)的，癌細(xì)胞主要通過 MCP-1 信號(hào)軸從外周血中募集未分化的單核細(xì)胞[68]。癌癥分泌的 IL-4 和 IL-13 隨后促進(jìn)這些浸潤(rùn)性單核細(xì)胞向 M2 表型極化[69]。
據(jù)觀察，TAM 通過主動(dòng)抑制 CTL 反應(yīng)來調(diào)節(jié) TME（圖 2）。這主要通過在細(xì)胞表面表達(dá)抑制性配體以及釋放損害 CTL 擴(kuò)增和功能的免疫抑制細(xì)胞因子來實(shí)現(xiàn)。TAM 還在募集免疫抑制性 Treg 方面發(fā)揮作用，其功能和在免疫抑制微環(huán)境中的作用將在后面的部分進(jìn)一步討論。TAM 表達(dá)許多與 CTL 表面顯示的免疫檢查點(diǎn)相互作用的配體，從而導(dǎo)致 CTL 抑制。例如，TAM 表達(dá) PD-L1，它與激活的 CTL 表面的 PD-1 受體結(jié)合，下調(diào)其功能和增殖 [70，71]。TAM 還表達(dá) CD80 和 CD86 配體，它們可以起到免疫刺激或免疫抑制作用，具體取決于它們與哪種受體相互作用[72CD80/CD86 可與 CD28 相互作用，共同刺激幼稚 CTL,然而，這些配體對(duì)活化 CTL 上的 CTLA-4 具有更強(qiáng)的親和力,CTLA-4 在幼稚 CTL 中的表達(dá)水平非常低，但當(dāng)這些細(xì)胞被激活/啟動(dòng)時(shí)，其表達(dá)就會(huì)上調(diào)。因此，CTLA-4 可以充當(dāng)制動(dòng)機(jī)制，使被 CTL 效應(yīng)活性吸引到該位點(diǎn)的表達(dá) CD80 和 CD86 的 TAM 在免疫反應(yīng)消除癌癥之前將其關(guān)閉。[78]這種動(dòng)態(tài)通常被用來在疾病清除之前過早抑制 CTL 功能，例如在 CD80 + /CD86 + TAM大量浸潤(rùn)的癌癥情況下。
TAM 促進(jìn)免疫抑制微環(huán)境，這是其與患者預(yù)后和結(jié)果不佳相關(guān)的主要原因之一。這些巨噬細(xì)胞還發(fā)揮許多其他促進(jìn)腫瘤的功能，例如誘導(dǎo)血管生成和細(xì)胞外基質(zhì)重塑，但這些不在本文的討論范圍內(nèi)，其他研究已詳細(xì)介紹 [79–82]。
2.2 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 (Treg)
Treg 是 CD4 + T 細(xì)胞的一個(gè)重要亞型，其作用是在異物清除后維持免疫原性自我耐受并抑制適應(yīng)性免疫反應(yīng)。CTL 和 Treg 之間的平衡被破壞已在多種病癥中觀察到，包括癌癥。在 I 型糖尿病、多發(fā)性硬化癥和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病中，Treg 無法抑制 CTL，導(dǎo)致自身免疫 [84]。另一方面，Treg 的過度活躍使得 CTL 群體無法中和病原體或腫瘤。正是 Treg 活性的上調(diào)使得癌癥能夠避免被 CTL 反應(yīng)消滅。
Treg 起源于幼稚 CD4 + T 細(xì)胞，其在胸腺中不斷成熟，直到 TCR 激活和叉頭框 P3 (FoxP3) 表達(dá)促進(jìn)抑制表型 [85可以通過 CD4、CD25、CTLA-4、淋巴細(xì)胞活化基因 3 (LAG-3)、神經(jīng)纖毛蛋白-1 (Nrp1) 和 FoxP3 的表達(dá)來識(shí)別 Tregs。[86–88],Treg 能夠通過接觸依賴性抑制以及通過釋放調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子來直接抑制活化的 CTL 功能。Treg 被吸引到炎癥部位并通過 IL-2（一種由活性 CTL 分泌的炎癥細(xì)胞因子）激活 [89]。由于 IL-2 也是 CTL 激活和擴(kuò)增所必需的，因此 Treg 上 IL-2 受體 IL-2R 的高表達(dá)使它們能夠迅速消耗周圍微環(huán)境中的 IL-2，從而抑制 CTL 激活。Treg 還可以通過接觸依賴性機(jī)制更直接地抑制效應(yīng)功能。Nakamura 等人已經(jīng)證明，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β-1 (TGF-β1) 在 Treg 表面的表達(dá)以接觸依賴性方式促進(jìn)免疫抑制，盡管控制這一過程的生物分子機(jī)制尚不清楚[90]。Treg 還表達(dá) LAG3，這是另一種對(duì) MHC II 類和 CD4 具有親和力的免疫抑制細(xì)胞表面配體。盡管 LAG3 是一種主要與 CTL 相關(guān)的抑制性受體，但最近的研究表明，它對(duì) Treg 的免疫抑制功能至關(guān)重要，盡管其原因仍有待闡明[91]。LAG3 與一種 T 淋巴細(xì)胞亞群 (CTL) 中的抑制有關(guān)，但與另一種 T 淋巴細(xì)胞 (Treg) 的激活有關(guān)，這種現(xiàn)象已在其他細(xì)胞表面標(biāo)志物（如 PD-1 和 CTLA-4）中觀察到。Treg 分泌的免疫抑制細(xì)胞因子也在下調(diào)免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用。據(jù)觀察，這些調(diào)節(jié)細(xì)胞會(huì)釋放高水平的可溶性 TGF-β1 和 IL-10，這兩者都對(duì) CTL 活性和增殖有負(fù)面影響。TGF-β1 通過抑制 CTL 擴(kuò)增所必需的 TCR 復(fù)合物的活化而起作用 [92IL-10 通過抑制 CD28 的磷酸化發(fā)揮作用，CD28 是 CTL 激活共刺激途徑中與 TCR 互補(bǔ)的表面蛋白 [93]。
癌癥的誘發(fā)往往伴隨著免疫抑制環(huán)境的建立，而免疫抑制環(huán)境的建立則以幼稚 T 淋巴細(xì)胞的募集和激活為先導(dǎo)，形成 Treg。與 TAM 募集類似，Treg 遵循癌細(xì)胞建立的趨化梯度，主要基于 CCL22 趨化因子 [94],TGF-β 和 IL-10 等生長(zhǎng)因子刺激 TME 中 Treg 的快速增殖 [95]。TGF-β 還通過促進(jìn)非抑制性 CD25 − T 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為抑制性 CD4 +、 CD25 +、 FoxP3 + Treg 表型而發(fā)揮額外作用。Treg 轉(zhuǎn)運(yùn)到刺激其擴(kuò)增的 TME 中，形成協(xié)同循環(huán)，其中癌細(xì)胞和 Treg 促進(jìn)對(duì)方的生長(zhǎng)和增殖，從而建立高度免疫抑制的環(huán)境。
2.3 髓系抑制細(xì)胞 (MDSC)
MDSC 是存在于 TME 中的免疫抑制性髓系細(xì)胞，與患者預(yù)后不良有關(guān) [96健康個(gè)體中不存在 MDSC。這些細(xì)胞是癌癥等病理?xiàng)l件下特有的，它們來源于髓系祖細(xì)胞，這些細(xì)胞向成熟髓系的分化受到抑制（圖 3)[97]。正常情況下，未成熟的髓系細(xì)胞從骨髓轉(zhuǎn)移到外周器官，在那里它們迅速成熟為巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞或粒細(xì)胞。然而，在癌癥中，這些未成熟細(xì)胞的分化受到腫瘤中存在的各種信號(hào)因子的抑制，例如 GM-CSF、巨噬細(xì)胞集落刺激因子 (M-CSF)、IL-6、IL-10 和 TNF-α[98，99]。此外，這些因素還會(huì)誘導(dǎo)未成熟的髓系細(xì)胞活化為免疫抑制表型。這些未成熟的免疫抑制髓系細(xì)胞被稱為MDSC。
MDSC 沒有 MDSC 特異性生物標(biāo)志物。相反，它們表達(dá)指示髓系譜系的生物標(biāo)志物，例如 CD11b 和 CD33，但缺乏完全分化細(xì)胞的標(biāo)志物 [100]。利用這些標(biāo)準(zhǔn)，MDSC 通常以人類的 CD11b + CD14 − CD33 +生物標(biāo)志物譜和小鼠的 CD11b + Gr1 +譜為特征 [100]。MDSC 通過趨化因子分泌被募集到 TME。特別是，癌細(xì)胞產(chǎn)生的 CCL2、CXCL8 和 CXCL12 與大多數(shù) MDSC 運(yùn)輸有關(guān) [101]。
MDSC 的免疫抑制是由活性氧 (ROS) 和細(xì)胞因子產(chǎn)生以及精氨酸耗竭介導(dǎo)的。在 Corzo 等人的一項(xiàng)研究中，MDSC 中 ROS 的產(chǎn)生增加導(dǎo)致 CTL 中的 DNA 損傷和細(xì)胞凋亡 [102]。ROS 還會(huì)干擾 CTL 通過 TCR 識(shí)別抗原的能力，從而下調(diào) CTL 活性。例如，超氧化物 (O2− ) 可與一氧化氮 (NO) 反應(yīng)形成過氧亞硝酸鹽 (ONOO − )，這種物質(zhì)通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和抑制控制 TCR 正確形成的磷酸化途徑來抑制 CTL 活性 [103]。CTL 的代謝饑餓是 MDSC 抑制免疫反應(yīng)的另一種方式。精氨酸是 CTL 中蛋白質(zhì)合成和擴(kuò)增所必需的氨基酸 [104MDSC 大量表達(dá)一氧化氮合酶 (NOS) 和精氨酸酶（兩種主要的精氨酸代謝物），嚴(yán)重降低 CTL 可利用的精氨酸量，削弱其增殖和控制癌癥生長(zhǎng)的能力。[105]。
此外，MDSC 還能招募其他免疫抑制細(xì)胞。Huang 等人的過繼細(xì)胞轉(zhuǎn)移研究表明，MDSC 產(chǎn)生的 IL-10 和 TGF-β 是誘導(dǎo) Treg 及其相關(guān)免疫抑制所必需的 [106此外，Sinha 等人將 MDSC 與 M1 巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，并表現(xiàn)出以接觸依賴的方式向促進(jìn)腫瘤的 M2 表型極化 [107]。這一觀察結(jié)果顯示巨噬細(xì)胞釋放的T細(xì)胞刺激性IL-12減少。此外，他們的研究表明，通過使用化療藥物吉西他濱消除MDSC可恢復(fù)IL-12的產(chǎn)生和腫瘤免疫力。
如上所述，免疫抑制細(xì)胞并不是單獨(dú)導(dǎo)致癌癥進(jìn)展的孤立細(xì)胞群。相反，它們以協(xié)同和相互依賴的方式相互作用并與周圍環(huán)境相互作用。它們所依賴的生化信號(hào)（尤其是趨化因子）有很多重疊，這使得這些信號(hào)分子成為免疫療法的潛在靶點(diǎn)。
3 針對(duì)免疫抑制細(xì)胞的肽
肽是免疫療法的有力候選者，因?yàn)樗鼈兡軌蛞愿叨忍禺愋缘乃浇Y(jié)合并誘導(dǎo)靶細(xì)胞/受體的反應(yīng)。此外，肽化學(xué)領(lǐng)域的最新進(jìn)展使其合成速度更快、更具成本效益且更方便[108此外，肽可以整合到納米顆粒系統(tǒng)中，增強(qiáng)其體內(nèi)穩(wěn)定性，并允許將其納入多模式療法中[53–55，109–113],例如，納米粒子可以用肽進(jìn)行功能化，以促進(jìn)與細(xì)胞膜的相互作用并介導(dǎo)內(nèi)吞作用。[114]。納米顆粒還可以通過將肽濃縮成致密的納米顆粒來增強(qiáng)肽的治療效果。[115]。這通常是通過化學(xué)結(jié)合將肽部分植入納米材料基底上來實(shí)現(xiàn)的。例如，一種常用的結(jié)合策略是使用 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二酰亞胺 (EDC) 將肽 N 端的游離胺與用羧酸基團(tuán)功能化的納米顆�；追磻�(yīng)，在肽和納米顆�；字g形成酰胺接頭[116–119],由于肽的 C 端也有游離羧酸，因此可以利用同樣的策略將肽與胺基封端的納米粒子結(jié)合。將肽直接結(jié)合到納米顆�；|(zhì)上的另一種方法是用富含硫的半胱氨酸基團(tuán)終止肽序列，并與馬來酰亞胺功能化的納米顆粒反應(yīng)。高親和力、非共價(jià)相互作用也可用于將肽與納米顆粒底物連接。例如，生物素化的肽可用于與展示鏈霉親和素部分的納米顆粒緊密結(jié)合,此外，可以調(diào)節(jié)靜電相互作用以實(shí)現(xiàn)肽和納米顆粒之間所需的相互作用,據(jù)Blank-Shim等人報(bào)道，他們使用強(qiáng)正電荷的精氨酸同肽（等電點(diǎn)為11.15）與帶負(fù)電荷的磁性納米粒子結(jié)合。
可以通過動(dòng)態(tài)光散射 (DLS) 和透射電子顯微鏡 (TEM) 表征納米粒子特性來確認(rèn)納米粒子的功能化，以檢查肽結(jié)合之前和之后的納米粒子大小、形態(tài)和多分散性。此外，納米顆粒的zeta電位通常用于檢測(cè)肽官能化賦予的表面電荷差異,核磁共振（NMR）和圓二色性（CD）光譜的變化也用于確認(rèn)肽結(jié)合，以及檢查肽二級(jí)結(jié)構(gòu).
本篇小型評(píng)論的其余部分將重點(diǎn)介紹以肽為重點(diǎn)的研究，這些研究已用于癌癥免疫治療策略，重點(diǎn)是解決免疫抑制 TAM、Treg 和 MDSC，并評(píng)估免疫治療肽和肽納米顆粒的前景。
3.1 瞄準(zhǔn)目標(biāo)客戶
鑒于 TAM 的免疫抑制作用及其與癌癥預(yù)后的負(fù)相關(guān)性，已開發(fā)出多種新型肽，不僅靶向巨噬細(xì)胞本身，還靶向其單核細(xì)胞前體，以及促進(jìn)其誘導(dǎo)和病理行為的生化途徑。Pun 等人通過噬菌體展示開發(fā)并驗(yàn)證了一種新型 M2 巨噬細(xì)胞靶向肽 M2pep (YEQDPWGVKWWY) [133]。通過將 Alexa Fluor 660 標(biāo)記的 M2pep 注射到小鼠腹腔內(nèi)來確定 M2pep 的靶向能力。從腹腔內(nèi)細(xì)胞以及脾臟中采集的細(xì)胞表明，M2pep 能夠靶向 B 細(xì)胞、T 細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等混合細(xì)胞群中的 F4/80 +、CD301 +、CD11c + M2 巨噬細(xì)胞（圖 4a 和 b)。此外，與非靶向 (亂序肽) 對(duì)照相比，M2pep 表現(xiàn)出更高的結(jié)合力。
Scodeller 等人進(jìn)行的噬菌體展示實(shí)驗(yàn)確定了一個(gè)短肽序列 CSPGAKVRC（稱為“UNO”），能夠靶向 M2 巨噬細(xì)胞特異性 CD206 表面標(biāo)志物 [136]。通過將熒光標(biāo)記的 UNO 注射到 4T1 腫瘤小鼠體內(nèi)，驗(yàn)證了 UNO 的靶向能力。小鼠被處死，注射后 2 小時(shí)收獲其器官。收獲組織的共聚焦顯微鏡檢查顯示 UNO 和 CD206 高度共定位，96% 的 UNO 陽性細(xì)胞也對(duì) CD206 染色呈陽性。此外，Lee 等人將蜜蜂毒液中發(fā)現(xiàn)的 26 個(gè)氨基酸肽蜂毒素 (MEL) 確定為 CD206 靶向序列 [137，138MEL 是一種兩親性肽，已被研究作為一種抗癌藥物，因?yàn)樗軌蛲ㄟ^線粒體孔隙形成誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，以及通過下調(diào) VEGF 表達(dá)抑制血管生成。[139，140]。作者研究了MEL單獨(dú)作用以及MEL與細(xì)胞毒性T細(xì)胞因子（KLAKLAK）融合的抗腫瘤作用。2通過將 MEL 或 MEL-KLA 施用于 Lewis 肺癌 (LLC) 小鼠模型，可以產(chǎn)生肽 (KLA) (MEL-KLA) [138]。治療在腫瘤接種后 5 天開始，每 3 天注射一次，直到接種后 12 天處死小鼠。結(jié)果顯示，與 PBS 治療的對(duì)照組以及 KLA 和 MEL 單一療法相比，MEL-KLA 治療后腫瘤重量顯著下降。為了進(jìn)一步研究 MEL 的 M2 靶向能力，該組的另一項(xiàng)研究表明，在 LLC 模型中，MEL 治療后 M1/M2 巨噬細(xì)胞比率從 0.65 增加到 1.55 [137M1/M2 比率是一種越來越常用的指標(biāo)，據(jù)報(bào)道，該比率與人類癌癥的預(yù)后呈正相關(guān)。141]。M1/M2比率的變化歸因于MEL對(duì)M2巨噬細(xì)胞的細(xì)胞毒性，通過流式細(xì)胞術(shù)和qPCR中M2巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD206的減少得到驗(yàn)證。
3.2 針對(duì) Tregs
2004 年，神經(jīng)纖毛蛋白-1 (Nrp1) 受體首次被 Bruder 等人發(fā)現(xiàn)為潛在的 Treg 標(biāo)記物。[88]。Nrp1 最初被確定為 VEGF 的輔助受體，現(xiàn)在已被確定為 Treg 功能所必需的。其在這些 T 細(xì)胞上的表達(dá)與 FoxP3 表達(dá)相關(guān)，暗示其作為免疫抑制表型的介質(zhì)的作用 [142此外，Delgoffe 等人最近的一項(xiàng)研究還發(fā)現(xiàn)了其在維持 Treg 穩(wěn)定性中的作用，因?yàn)橥ㄟ^ Nrp1 的上調(diào)導(dǎo)致該群體不穩(wěn)定是癌癥的常見特征。143毫不奇怪，涉及基因敲除模型和抗體阻斷的 Nrp1 臨床前研究已導(dǎo)致皮膚癌、肺癌和前列腺癌的腫瘤生長(zhǎng)減少。144Nrp1 肽 LyP-1 (CGNKRTRGC) 的發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致了通過 Nrp1 專門針對(duì) Tregs 的 NP 系統(tǒng)的開發(fā)[145，146]。LyP-1 屬于肽家族的一部分，稱為 C 端 C 端規(guī)則 (CendR) 基序肽，它們具有腫瘤穿透能力。在一項(xiàng)研究中歐等人開發(fā)了一種納米粒子，該粒子包含一個(gè) PLGA 核心，其中負(fù)載有抗 CTLA-4、酪氨酸激酶抑制劑伊馬替尼 (IMT) 和 LyP-1 作為靶向配體，與傳統(tǒng)的抗 CTLA-4 免疫療法相比，該納米粒子顯著降低了 B16 小鼠黑色素瘤模型中的腫瘤生長(zhǎng)。在腫瘤接種后 10 天開始，每 2 天對(duì)小鼠進(jìn)行一次治療，共 15 天，治療藥物包括 PBS、游離 IMT、游離抗 CTLA-4、非靶向 IMT 負(fù)載納米粒子、靶向 IMT 負(fù)載納米粒子以及靶向抗 CTLA-4 和 IMT 負(fù)載納米粒子。結(jié)果表明，包含 LyP-1、IMT 和抗 CTLA-4 的完整納米粒子最為有效，與游離抗 CTLA-4 相比，腫瘤體積減少了 50% 以上，證明了基于肽的納米粒子在增強(qiáng)臨床標(biāo)準(zhǔn)方面具有潛力 [144]。
Pastor 等人通過將 FoxP3 抑制肽 (P60) 與 CD28 靶向適體 (AptCD28-P60) 結(jié)合，創(chuàng)建了另一種靶向 Treg 的納米顆粒 [147，148]。結(jié)果表明，與未結(jié)合的 P60 相比，結(jié)合分子能夠以低 200 倍的濃度（100 μM vs. 0.5 μM）對(duì)抗 Treg 介導(dǎo)的 CTL 免疫抑制。此外，與鹽水對(duì)照、單獨(dú)肽疫苗、肽疫苗和未結(jié)合的 P60 以及肽疫苗和未結(jié)合的 P60 與未結(jié)合的 AptCD28 相比，用 AptCD28-P60 聯(lián)合腫瘤抗原肽疫苗 (AH1) 治療 CT-26 癌模型可消除腫瘤，表明將 P60 與 AptCD28 結(jié)合以實(shí)現(xiàn)協(xié)同治療的必要性（圖 5）。
鑒于 MDSC 屬于未成熟細(xì)胞群，尚未發(fā)現(xiàn)它們表達(dá)可用于肽結(jié)合的 MDSC 特異性生物標(biāo)志物。不過，Qin 等人已利用噬菌體展示篩選 MDSC 結(jié)合肽 [149]。所選肽（MEWSLEKGYTIK）與鼠 IgG2b 的 Fc 區(qū)融合，形成肽抗體結(jié)合物（H6 肽體）。用 H6 肽體治療導(dǎo)致多種鼠淋巴瘤模型（EL4、EG.7、A20）中脾臟和循環(huán)中的 MDSC 耗竭，并在 EL4 模型中表現(xiàn)出抗腫瘤功效。此外，Wang 等人研究了趨化因子阻斷作為間接影響 MDSC 群體的手段的有效性 [150他們使用 CCL2 激動(dòng)劑來抑制 CCL2 信號(hào)傳導(dǎo)，CCL2 信號(hào)傳導(dǎo)是與 MDSC 遷移有關(guān)的主要趨化劑[151，152]。這導(dǎo)致肺癌模型中 MDSC 向 TME 的浸潤(rùn)顯著減少。值得注意的是，觀察到 CCL2 阻斷也提高了抗 PDL1 治療的療效，可能是通過 MDSC 耗竭實(shí)現(xiàn)的。
4 當(dāng)前展望和結(jié)論
近年來，在建立和維持免疫抑制微環(huán)境方面，人們對(duì)免疫抑制細(xì)胞和癌細(xì)胞之間的相互作用的理解取得了進(jìn)展。此外，在將這些知識(shí)應(yīng)用于本文所述的肽基療法方面也取得了長(zhǎng)足進(jìn)步。然而，針對(duì)免疫抑制細(xì)胞的肽和納米藥物在癌癥免疫療法中的應(yīng)用還處于早期階段。因此，這些技術(shù)在人類身上的臨床應(yīng)用受到限制。這可能是由于缺乏對(duì)肽納米顆粒與生物環(huán)境相互作用以及改變納米顆粒命運(yùn)、功效和毒性的蛋白質(zhì)外殼形成的理解[153，154]。另一個(gè)挑戰(zhàn)包括擴(kuò)大肽功能化納米顆粒的規(guī)模，以及批次間差異，從而限制了商業(yè)化潛力。此外，在將免疫抑制細(xì)胞的免疫治療靶向轉(zhuǎn)化為臨床之前，需要對(duì)人體的免疫網(wǎng)絡(luò)有更深入的了解。例如，盡管TAM、Tregs和MDSC與經(jīng)典CTL的相互作用已經(jīng)得到充分研究，但其他免疫細(xì)胞，如自然殺傷（NK）細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，都具有獨(dú)特而復(fù)雜的功能和相互作用，值得進(jìn)一步研究�；陔牡募{米顆粒是一種工具，可為研究人員和臨床醫(yī)生提供一種靶向特定分子途徑和細(xì)胞間相互作用的方法，這些途徑和相互作用有助于癌癥進(jìn)展，但為了有效利用這些工具，擴(kuò)展我們對(duì)免疫學(xué)的理解至關(guān)重要。進(jìn)一步了解免疫網(wǎng)絡(luò)將使研究人員不僅能夠更好地開發(fā)新型納米顆粒系統(tǒng)，還能更好地預(yù)測(cè)其體內(nèi)功效。
我們對(duì)癌癥免疫療法的認(rèn)識(shí)的一個(gè)主要缺陷在于，無法確定臨床治療反應(yīng)的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物。盡管有些病例表明免疫療法可以根除化療耐藥性腫瘤，但現(xiàn)實(shí)情況是，只有少數(shù)患者對(duì)治療有反應(yīng)。患者反應(yīng)不一致可歸因于癌癥的異質(zhì)性，也可歸因于缺乏預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物,盡管已經(jīng)鑒定出一些標(biāo)志物，如免疫檢查點(diǎn)和免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，但其他預(yù)后標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)可以用于優(yōu)化患者選擇，并進(jìn)一步了解免疫治療背后的機(jī)制。此外，這些生物標(biāo)志物的組合使用能夠具有更準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)能力。
納米醫(yī)學(xué)使組合療法的使用更加可行，因?yàn)榧{米顆�？梢栽O(shè)計(jì)成包含多個(gè)生物活性部分。此外，將生物活性材料包裝到納米顆粒中可確保它們被遞送到所需的目標(biāo)，從而減少脫靶遞送和毒性。這里重點(diǎn)介紹的許多研究表明，組合療法可以提高單一治療臨床標(biāo)準(zhǔn)的有效性和安全性[137，148]。隨著科學(xué)研究不斷填補(bǔ)上述知識(shí)空白，基于肽的納米粒子將繼續(xù)發(fā)展，并構(gòu)成一類能夠靶向免疫抑制細(xì)胞群的納米材料。
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