摘要:與抗體相比,肽在體內(nèi)的親和力較低,半衰期較短。相反,肽在組織滲透和細(xì)胞內(nèi)化方面比抗體更有效。無論肽的優(yōu)缺點如何,它們都已被用作腫瘤歸巢配體,用于將載體(如納米顆粒、細(xì)胞外囊泡和細(xì)胞)和貨物(如細(xì)胞毒性肽和放射性同位素)輸送到腫瘤。此外,腫瘤歸巢肽已通過接頭與小分子或化療藥物等貨物結(jié)合,以合成肽-藥物偶聯(lián)物。此外,肽選擇性地與細(xì)胞表面受體和蛋白質(zhì)結(jié)合,例如免疫檢查點、受體激酶和激素受體,隨后阻斷它們的生物活性或用作激素類似物。此外,進入細(xì)胞的肽與細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合并干擾蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。因此,肽作為癌癥治療中的多功能參與者具有巨大的應(yīng)用潛力。
腫瘤歸巢肽作為靶向配體
肽靶向納米粒子遞送
腫瘤歸巢肽已用于通過肽與細(xì)胞表面受體或結(jié)合伙伴之間的直接相互作用將納米顆粒引導(dǎo)至癌細(xì)胞。一般而言,它們被設(shè)計為腫瘤細(xì)胞特異性的,以增強納米顆粒進入腫瘤細(xì)胞的內(nèi)化。納米顆粒上肽的多價標(biāo)記增加了肽的結(jié)合親和力。此外,肽與納米顆粒的結(jié)合往往可以保護肽免受蛋白酶介導(dǎo)的降解。最著名的腫瘤歸巢肽是 RGD 肽,包括 RGD4C (ACDCRGDCFCG) 和 Cilengitide™ (RGDfV),它們與腫瘤血管的血管生成內(nèi)皮細(xì)胞中過表達的 αvβ3 整合素結(jié)合,從而抑制血管生成。RGD肽與藥物或載藥納米顆粒的結(jié)合已在癌癥治療中得到深入研究。內(nèi)化RGD或iRGD(CRGDR/KGPDC)是RGD肽的改良版本,不僅與αV整合素結(jié)合,而且還增加了藥物的組織滲透性。RGD基序與腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞中表達的αV整合素結(jié)合會誘導(dǎo)蛋白酶介導(dǎo)的iRGD肽裂解,產(chǎn)生兩種肽,即CRGDR/K和GPDC。隨后,含有C末端CendR基序(R/KXXR/K)的CRGDR/K肽與神經(jīng)纖毛蛋白-1結(jié)合,激活內(nèi)吞途徑。因此,iRGD 無論是與藥物結(jié)合還是共同給藥,都能增加藥物的組織滲透性。
肽靶向遞送EV或外泌體
EV 或外泌體是從細(xì)胞分泌到循環(huán)中的內(nèi)源性納米顆粒。它們可以攜帶 DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)并將它們分布在細(xì)胞之間。在裝載治療劑的外泌體表面標(biāo)記腫瘤歸巢肽可以減少癌癥治療中的主要不良副作用。外泌體的表面修飾通過兩種方法進行:基因工程和非基因工程。利用基因工程,樹突狀細(xì)胞 (DC) 已被改造為分泌表達 Lamp2 的外泌體,Lamp2 是一種外泌體膜蛋白,與神經(jīng)元特異性 RVG 肽 (YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG) 融合,隨后,RVG 肽引導(dǎo)的外泌體被用于靶向 γ-氨基丁酸 (GABA) 受體,將短干擾 RNA 遞送至腦中的神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞,誘導(dǎo)靶基因敲除,而其他組織中的非特異性攝取可忽略不計。同樣,小鼠未成熟樹突狀細(xì)胞被基因改造以分泌表達與 iRGD 肽 (CRGDR/KGPDC) 融合的 Lamp2 蛋白的外泌體,并顯示出對 αv 整合素陽性乳腺癌細(xì)胞的高效靶向藥物遞送,從而抑制腫瘤生長. 經(jīng)基因工程改造后,表達與 GE11 肽 (YHWYGYTPQNVI)(一種表皮生長因子受體 (EGFR) 結(jié)合肽)融合的血小板衍生生長因子受體跨膜結(jié)構(gòu)域的細(xì)胞外泌體可選擇性地將 let-7a microRNA 遞送至乳腺癌組織。此外,經(jīng)基因工程改造后,表達 pH 敏感的融合 GALA 肽 (WEAALAEALAEALAEHLAEALAEALEALAA) 的腫瘤細(xì)胞衍生外泌體可有效地將腫瘤抗原遞送至樹突狀細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,并通過主要組織相容性復(fù)合體 I 類分子促進樹突狀
細(xì)胞的腫瘤抗原呈遞
外泌體表面也已使用脂質(zhì)膜錨、靜電相互作用和配體-受體相互作用進行了非遺傳修飾。M1巨噬細(xì)胞衍生的外泌體用NF-κBp50siRNA和miR-511-3p轉(zhuǎn)染以促進M1極化,并使用磷脂錨用IL4R靶向IL4RPep-1肽(CRKRLDRNC)進行表面修飾;這些構(gòu)建體通過將IL4R高和M2極化的TAM重新編程為M1樣表型來抑制腫瘤進展.通過與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體相互作用,用轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)的超順磁性納米粒子對血液外泌體進行表面修飾,通過靜電相互作用用L17E內(nèi)體溶解肽(IWLTALKFLGKHAAKHEAKQQLSKL)進行表面修飾,以及通過錨定到脂質(zhì)膜上用膽固醇偶聯(lián)的miR-21抑制劑進行表面修飾,可增加腫瘤蓄積和藥物輸送,并實現(xiàn)有效的內(nèi)體逃逸.用包含烷基鏈(C16)、光敏劑(原卟啉IX)和核定位信號肽(PKKKRKV)的嵌合肽(C16K-原卟啉IX-PKKKRKV)進行表面標(biāo)記的外泌體可以增強光敏劑的核輸送,并通過光動力療法有效抑制腫瘤生長,用于遞送EV的腫瘤歸巢肽總結(jié)于表3中。
肽引導(dǎo)的細(xì)胞遞送
在過繼細(xì)胞療法中,增強細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的腫瘤歸巢需求很高。因此,嵌合抗原受體(CAR)-T細(xì)胞已被用來解決這一限制。CAR-T細(xì)胞經(jīng)過基因改造,可表達由針對腫瘤抗原(如CD19)的抗體、T細(xì)胞受體zeta鏈的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域和共刺激結(jié)構(gòu)域組成的嵌合受體。相反,細(xì)胞表面的非基因修飾可以降低由細(xì)胞基因工程引起的意外風(fēng)險。使用基于磷脂的膜錨標(biāo)記有IL4R結(jié)合IL4RPep-1肽(CRKRLDRNC)的CTL在攜帶B16F10黑色素瘤的小鼠中表現(xiàn)出增強的腫瘤歸巢和抗腫瘤生長活性.除了CTL之外,在細(xì)胞表面與E-選擇素靶向肽(CGSDITWDQLWDLMK)結(jié)合的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)通過干細(xì)胞上的肽與內(nèi)皮細(xì)胞上的E-選擇素之間的相互作用表現(xiàn)出可控的粘附和滾動。此外,使用聚丙烯酰胺接頭和生物素/鏈霉親和素相互作用對MSC進行非遺傳表面修飾,使其與唾液酸LewisX碳水化合物結(jié)合,顯示出在內(nèi)皮上強勁滾動,并且在體內(nèi)更有效地歸巢于發(fā)炎組織,比未標(biāo)記的MSC。
肽靶向細(xì)胞毒肽
此外,其他細(xì)胞毒性或溶解肽,如防御素1(ACYCRIPACIAGERRYGTCIYQGRLWAFCC)、天蠶素B(KWKVFKKIEKMGRNIRNGIVKAGPAIAVLGEAKAL)、爪蟾抗菌肽(GIGKFLHSAKKFGKAFVGEIMSNS)和皮抑菌肽(ALWKEVLKNAGKAALNEINNLVG),可增加膜通透性并促進細(xì)胞死亡。乳鐵蛋白5衍生物(PAWRKAFRWAWRMLKKAA)也表現(xiàn)出對腫瘤細(xì)胞的選擇性細(xì)胞毒性。eMTD肽(KLNFRQKLLNLISKLFCSGT)由Noxa蛋白的BH3結(jié)構(gòu)域和線粒體靶向結(jié)構(gòu)域組成,通過與電壓依賴性陰離子通道2相互作用導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷和壞死性細(xì)胞死亡。此外,由前列腺特異性膜抗原(PSMA)底物與膜破壞性阿米巴變形蟲H3肽(GFIATLCTKVLDFGIDKLQLIEDK)連接的肽對表達PSMA的LNCaP前列腺癌細(xì)胞具有高度活性,但對PSMA陰性的PC3前列腺癌細(xì)胞則無活性。本節(jié)中描述的細(xì)胞毒性肽總結(jié)在表4中。
肽靶向放射性核素:肽受體放射性核素治療
肽受體放射性核素治療 (PRRT) 涉及將腫瘤歸巢肽與放射性核素或放射性同位素組合作為治療物質(zhì)。PRRT 的優(yōu)點包括其在遞送放射性核素方面的選擇性,從而減少全身副作用,以及其對晚期、無法手術(shù)或轉(zhuǎn)移性腫瘤的有效控制;然而,對健康器官(尤其是骨髓)的放射誘導(dǎo)毒性仍然是一個主要限制。奧曲肽 (Sandostatin®,F(xiàn)CFWKTCT) 是一種生長抑素類似物的 8 聚體肽,在治療神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤患者中起著至關(guān)重要的作用. PRRT 與奧曲肽聯(lián)合治療旨在選擇性照射表達生長抑素受體 2 (SSTR2) 的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞及其周圍血管,以抑制治療期間的血管生成反應(yīng)。111 In 使用二乙烯三胺五乙酸與奧曲肽連接,而90 Y 和177 Lu (Lutathera®) 則使用四氮雜環(huán)十二烷四乙酸作為螯合劑連接。除了 SSTR2,PRRT 還擴展到其他受體,例如胃泌素釋放肽 (GRP) 和膽囊收縮素-2 (CCK-2) 受體。99mTc 結(jié)合的 RP527 肽( VPLPAGGGTVLTKMYPRGNHWAVGHLM) 是一種 GRP 類似物,已用于治療人類惡性腫瘤,包括結(jié)腸癌和前列腺癌。111 In 標(biāo)記的微胃泌素 (LEEEEEAYGWMDF) 是一種 CCK-2 受體選擇性肽,已用于治療人類結(jié)直腸癌和胰腺腫瘤。
肽靶向小分子藥物:肽-藥物偶聯(lián)物
肽抑制劑或細(xì)胞表面蛋白拮抗劑
免疫檢查點抑制劑
免疫檢查點抑制劑 (ICI) 的出現(xiàn)徹底改變了腫瘤治療領(lǐng)域,并促進了更多免疫檢查點阻斷劑的開發(fā)。ICI 通過阻斷 CTL 相關(guān)蛋白 4 (CTLA-4)、程序性細(xì)胞死亡-1 (PD-1) 和程序性細(xì)胞死亡配體-1 (PD-L1) 等免疫檢查點與其配體之間的相互作用起作用,從而釋放 T 細(xì)胞的抑制性制動器并導(dǎo)致免疫反應(yīng)的強烈激活(圖3)。例如,CTLA-4 是一種主要由 T 細(xì)胞表達的抑制性受體,可抑制 T 細(xì)胞活性并在 T 細(xì)胞活化時上調(diào),目前,免疫檢查點抑制劑(ICI)被用作各種實體腫瘤的一線治療手段。在過去的幾十年中,抗體藥物被廣泛應(yīng)用于免疫檢查點抑制劑(ICI)。伊匹單抗是美國FDA批準(zhǔn)用于治療人類癌癥的第一個CTLA-4阻斷抗體?筆D-1抗體如派姆單抗和納武單抗是第二批獲批用于治療人類惡性腫瘤的抗體,隨后是抗PD-L1抗體如阿替利珠單抗、度伐單抗和阿維單抗。
受體酪氨酸激酶、激酶相關(guān)受體和其他表面蛋白的肽拮抗劑
腫瘤細(xì)胞表達豐富的生長因子細(xì)胞表面受體。因此,受體阻滯劑或拮抗性抗體和肽可用作抗癌劑。c-Met是一種受體酪氨酸激酶,在許多腫瘤中過表達。它與肝細(xì)胞生長因子(HGF)結(jié)合,在腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移中起重要作用。利用計算機模擬,設(shè)計了新的肽序列,包括CM7肽(DQIIANN),以高親和力與c-Met結(jié)合。這種新型肽與c-Met表達細(xì)胞結(jié)合,抑制小鼠中c-Met介導(dǎo)的細(xì)胞遷移和侵襲以及腫瘤進展。二硫鍵約束的HGF結(jié)合肽,即HB10(VNWVCFRDVGCDWVL),抑制HGF–c-Met結(jié)合,可溶性肝素結(jié)合表皮生長因子(sHB-EGF)是抗擊癌癥腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的另一個靶點。利用噬菌體展示技術(shù),已鑒定出兩種sHB-EGF結(jié)合肽,即DRWVARDPASIF和TVGLPMTYYMHT。它們通過抑制EGFR信號通路來抑制sHB-EGF促進卵巢腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲的活性。
CD44是一種細(xì)胞表面受體,參與細(xì)胞粘附到細(xì)胞外基質(zhì)。盡管CD44在正常細(xì)胞中表達,但其可變剪接異構(gòu)體(包括CD44變體6(CD44v6))在腫瘤細(xì)胞中上調(diào),通過與c-Met相互作用促進腫瘤細(xì)胞遷移和轉(zhuǎn)移。通過結(jié)構(gòu)分析,從人類CD44v6結(jié)構(gòu)域中篩選出v6pep(KEQWFGNRWHEGYR),該結(jié)構(gòu)域與c-Met相互作用并抑制胰腺癌模型中的腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。目前v6pep正在進行臨床試驗,通過篩選噬菌體展示隨機肽庫,篩選出與CD44v6表達細(xì)胞結(jié)合的NLN(CNLNTIDTC)和NEW(CNEWQKLSC)肽,這些肽能阻礙HGF介導(dǎo)的c-Met活化,從而抑制CD44v6高的腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲。
激素受體的肽拮抗劑
有些癌癥依賴激素生長,因此,阻斷激素的作用可以減緩或控制癌癥的生長。這種療法被稱為激素療法或內(nèi)分泌療法。目前,激素療法適用于某些類型的癌癥,例如乳腺癌和前列腺癌。激素療法在手術(shù)或放射療法之前作為輔助療法使用,可以縮小腫瘤大小并降低腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險。
促性腺激素釋放激素 (GnRH),也稱為促黃體激素釋放激素,由下丘腦釋放。它與垂體中的 GnRH 受體結(jié)合,增加促卵泡激素和促黃體激素的產(chǎn)生,從而刺激卵巢釋放雌激素。首次使用 GnRH 類似物時,卵巢激素會激增,這也會引起潮熱等多種不良反應(yīng)。然而,長期使用 GnRH 類似物會減少卵巢激素的產(chǎn)生和分泌,從而下調(diào)和降低垂體促性腺細(xì)胞中的 GnRH 受體的敏感性,某些癌癥中也存在 GnRH 受體,而循環(huán)雌激素的減少會減緩激素受體陽性腫瘤(如卵巢癌、前列腺癌和乳腺癌)的生長。由于 GnRH 類似物的半衰期較短,因此在臨床環(huán)境中使用 GnRH 類似物比較復(fù)雜。然而,通過對其氨基酸進行一些修飾,已經(jīng)成功開發(fā)出長效類似物,并用于治療乳腺癌和前列腺癌。目前在臨床上使用的 GnRH 類似物包括戈舍瑞林 (Zoladex®)、(pGlu)HWSY( D -Ser(Bu t )LRP)、亮丙瑞林或亮丙瑞林 (Lupron®、(pGlu)HWSY( D-Leu)LRP) 和曲普瑞林 (Decapeptyl®,(pGlu)HWSY( D -Trp)LRPG)。
生長抑素 (AGCKNFFWKTFTSC) 是一種由遍布胃腸道的旁分泌細(xì)胞產(chǎn)生的肽,可與生長抑素受體 (SSTR) 結(jié)合。奧曲肽 (FCFWKTCT) 是一種生長抑素類似物,可與 SSTR2 和 SSTR5 結(jié)合,并可作為生長激素、胰島素和胰高血糖素抑制劑。奧曲肽用于治療由某些腸道腫瘤(如血管活性腸肽分泌腫瘤或轉(zhuǎn)移性類癌)引起的嚴(yán)重腹瀉。
細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的肽抑制劑
細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)在細(xì)胞中發(fā)揮著關(guān)鍵作用;例如,它們促進蛋白質(zhì)復(fù)合物的形成以進行信號轉(zhuǎn)導(dǎo),并促進轉(zhuǎn)錄因子與啟動子和增強子的結(jié)合。因此,人們利用藥理學(xué)方法來抑制細(xì)胞內(nèi)PPI;相關(guān)化合物包括基于分子量<500Da的化學(xué)物質(zhì)的小分子和基于分子量>5000Da的蛋白質(zhì)的生物制劑。小分子可有效穿過細(xì)胞膜,并調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的作用。然而,這些藥物無法識別靶位的單個突變,腫瘤細(xì)胞容易獲得對這些藥物的耐藥性。此外,由于小分子太小,參與蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)大表面無法被小分子覆蓋。相反,生物制劑可以高選擇性地結(jié)合到更大的蛋白質(zhì)界面上。然而,它們的細(xì)胞滲透性較差。為了解決小分子和生物制劑的局限性,已經(jīng)開發(fā)出分子量在500到5000Da之間的干擾PPI的肽.多肽兼具小分子和生物制劑的優(yōu)點,包括小分子的細(xì)胞通透性和生物制劑的高選擇性,可以覆蓋大面積的蛋白質(zhì)?紤]到多肽抑制劑的序列往往來源于參與相互作用的內(nèi)源性蛋白質(zhì),它們中的大多數(shù)都充當(dāng)著天然蛋白質(zhì)相互作用的競爭對手。
c-Myc是一種參與多種人類惡性腫瘤的轉(zhuǎn)錄因子。它通常與其伴侶轉(zhuǎn)錄因子形成異二聚體復(fù)合物,與DNA結(jié)合并調(diào)節(jié)基因表達。來自Myc螺旋1C末端區(qū)域的14個氨基酸肽(RQIKIWFQNRRMKWKK)可阻斷c-Myc與其伴侶之間的相互作用。另一個例子是OmoMyc,它包含92個氨基酸,源自Myc的bHLHZip區(qū)域,但與Myc有四個氨基酸殘基不同。
同源框(HOX)是脊椎動物發(fā)育過程中身體分節(jié)和模式形成的重要轉(zhuǎn)錄因子。HOX基因表達通常在腫瘤中增強,并與腫瘤細(xì)胞的血管生成、轉(zhuǎn)移和增殖有關(guān)。HOX的常見輔助因子是前B細(xì)胞白血病同源框(PBX)。HXR9肽(WYPWMKKHHRRRRRRRRR)干擾幾種小鼠腫瘤模型中HOX和PBX之間的相互作用。
KRAS是一種致癌蛋白,通常在多種腫瘤中被激活,包括肺癌和胰腺癌,由于缺乏經(jīng)典的藥物結(jié)合位點,因此被認(rèn)為是一種不可治療的靶點。KRpep-2d肽(Ac-RRRR-cyclo(CPLYISYDPVC)-NH2)是一種含有>12個氨基酸的環(huán)狀肽,大環(huán)肽及其衍生物可與KRAS結(jié)合并抑制KRAS下游信號傳導(dǎo)和細(xì)胞增殖。
展望:改善肽的藥代動力學(xué)特性和生物活性