摘要 :聚乙二醇是一類具有獨特理化性質(zhì)的大分子聚合物:多肽和蛋白質(zhì)類藥物經(jīng)聚乙二醇共價修飾后能明顯改善其藥代學和藥效學性質(zhì)，如降低免疫原性、增加對蛋白水解酶的穩(wěn)定性、增加水溶性及延長體內(nèi)的半衰期等:蛋白質(zhì)的聚乙二醇化修飾研究已取得較好的效果，多肽的聚乙二醇化修飾研究起步較晚:對近年來多肽和蛋白質(zhì)的聚乙二醇化修飾方法進行了綜述，主要介紹了對多肽和蛋白質(zhì)的 ; 端、& 端及某些氨基酸側(cè)鏈進行選擇性聚乙二醇化修飾的方法:
蛋白質(zhì)的聚乙二醇化修飾研究始于二十世紀七十年代，最初的目的主要是為了降低蛋白質(zhì)類藥物的免疫原性:進一步的研究表明，蛋白質(zhì)經(jīng)聚乙二醇化修飾后還可以改善許多其它方面的性質(zhì)，如增加蛋白質(zhì)對酶的穩(wěn)定性、延長蛋白質(zhì)在血漿中的半衰期、增加在水中的溶解度等: 一些蛋白質(zhì)的聚乙二醇化修飾物在作為藥物的應用中取得了較好的效果,1991年，第一種經(jīng)聚乙二醇化修飾的蛋白質(zhì)類藥物PEG-腺苷脫氨酶被FDA批準上市，用于治療一種嚴重的兒童免疫缺陷癥: 2001年，用聚乙二醇修飾的干擾素（PEG-INTRON）經(jīng)FDA批準上市,用于治療慢性丙型肝炎: 多肽與蛋白質(zhì)在理化性質(zhì)上具有許多相似之處，肽類化合物的聚乙二醇化修飾研究晚于蛋白質(zhì)的相關(guān)研究，近年來關(guān)于肽類化合物的聚乙二醇化修飾研究也取得了一些進展，尤其是肽類化合物在聚乙二醇化定點修飾方面較蛋白類物質(zhì)更易于實現(xiàn)，因此開展肽類化合物的聚乙二醇化修飾研究也具有較重要的意義 :
在多肽的聚乙二醇化修飾研究中應用最普遍的是mPEG，先在mPEG的末端引入羧基、氨基或其它活性基團，或者制備經(jīng)mPEG修飾的氨基酸衍生物，再利用固相或液相法將其偶聯(lián)到肽序列中去，實現(xiàn)對多肽的N端，C端及某些氨基酸側(cè)鏈的聚乙二醇化修飾’下面主要介紹近年來文獻報道關(guān)于多肽和蛋白質(zhì)的聚乙二醇化定點修飾的一些方法’
1 多肽和蛋白質(zhì)中氨基的聚乙二醇化修飾方法
在多肽和蛋白質(zhì)的聚乙二醇化修飾方法中，主要是對N末端或賴氨酸側(cè)鏈氨基進行�；揎棥驗榈鞍捉Y(jié)構(gòu)中通常存在多個氨基，所以控制和確定修飾位點及修飾程度一直是蛋白質(zhì)的聚乙二醇化修飾中的一個難點’肽類化合物的合成中可以通過采用適當?shù)谋Ｗo策略來實現(xiàn)對氨基的定點修飾’
為了實現(xiàn)對肽鏈中氨基的聚乙二醇化�；揎�，需要在聚乙二醇上首先引入羧基或活化的羰基,1993年，Lu等首先報道了在固相多肽合成中應用單甲氧基聚乙二醇的羧基衍生物對肽鏈的N端氨基進行�；揎椀姆椒ǎ阂詍PEG作原料，先合成mPEG-OCH2COOH和 mPEG-OCH2CO-Nle-OH，在mPEG 中引入一個正亮氨酸（Nle）作為標記是為了便于確定每一個多肽分子上偶聯(lián)了幾個mPEG分子’應用Fmoc固相多肽合成法，先在樹脂上合成全保護肽鏈，當游離出N末端氨基后，以BOP作縮合劑，將mPEG-OCH2CO-Nle-OH 作為一個單體偶聯(lián)到肽鏈上，然后經(jīng)三氟乙酸裂解和反相高效液相色譜（RP-HPLC）純化得到了平均分子量分別為2000和5000的mPEG修飾N-端的4肽、8肽和12肽，MPEG修飾產(chǎn)物在RP-HPLC分析圖譜上呈單一峰，結(jié)構(gòu)經(jīng)MALDT-TOF-MS分析得到確證’研究還明，聚乙二醇對三氟乙酸處理穩(wěn)定，但氟化氫處理時會有部分斷裂，故此法不適用于BOC固相多肽合成法
Lee等以平均分子量為5000的單甲氧基聚乙二醇甲酰琥珀酰亞胺（SC-mPEG）在弱堿性水溶液中（PH=8）修飾鮭降鈣素（sCT），經(jīng)RP-HPLC分離得到N端、Lys和Lys側(cè)鏈氨基分別被聚乙二醇�；揎椀娜N產(chǎn)物，產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)酶解和質(zhì)譜分析得到確證，它們在大鼠腎臟勻漿中的半衰期分別為 125.5，157.3和 281.5min，比sCT在大鼠腎臟勻漿中的半衰期(4.8min）顯著增加,用相同的方法，Lee等以平均分子量為3400的SC-mPEG對表皮生長因子（EGF）進行修飾，經(jīng)RP-HPLC分離到N端、Lys和Lys側(cè)鏈氨基分別被聚乙二醇酰化修飾的三種產(chǎn)物’ 生物活性測定表明，N端修飾產(chǎn)物活性高于Lys和Lys側(cè)鏈修飾產(chǎn)物’
2 多肽鏈中羧基的聚乙二醇化修飾方法
3 多肽和蛋白質(zhì)中巰基的聚乙二醇化修飾方法
Camp等在生長激素釋放因子（GRF）類似物的C端引入半胱氨酸，在mPEG 上引入巰基吡啶，然后通過二硫鍵交換實現(xiàn)mPEG對GRF類似物C端的修飾
4 其它方法
5 結(jié)束語
隨著蛋白質(zhì)的聚乙二醇化修飾技術(shù)的迅速發(fā)展，肽類化合物的聚乙二醇化修飾研究越來越引人注目.蛋白質(zhì)的聚乙二醇化修飾幾乎都在水溶液中進行，通過選擇合適的聚乙二醇化試劑或控制反應條件來實現(xiàn)定點、定量修飾! 肽類化合物的聚乙二醇化修飾可在固相載體上進行，此法易于實現(xiàn)對多肽鏈中某位點的選擇性修飾，但固相合成反應速度慢，且隨著聚乙二醇或多肽分子量增加，修飾難度增大；肽類化合物的聚乙二醇化修飾也可以在水溶液中進行，可以實現(xiàn)分子量較大的聚乙二醇對分子量較大的多肽的修飾，但若有多個反應位點時產(chǎn)物分離及修飾位點的確定都有較大的難度 !多肽和蛋白質(zhì)類化合物經(jīng)聚乙二醇化修飾后具有降低免疫原性、增加水溶性、顯著延長其在生物體內(nèi)的半衰期等優(yōu)點，但也可能因修飾而影響其與受體的結(jié)合，因此尋找合適的修飾位點，保持持續(xù)、有效的生物活性是多肽和蛋白質(zhì)的聚乙二醇化修飾研究的主要目.多肽和蛋白質(zhì)類藥物的聚乙二醇化修飾研究有較好的應用前景!
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