在我們使用多肽的過程中,我們經(jīng)常會遇到多肽純度和多肽含量這兩個指標,而很多小伙伴可能會有這樣的疑問,為什么我們的多肽純度是95%,但是肽含量卻只有80%呢?因為,這個是兩個完全不同的概念。
多肽純度:多肽的純度是指使用HPLC分析法在214nm(214nm是肽鏈的吸收波長)處檢測到的目標多肽的含量;
多肽含量:是指樣品中肽類物質(zhì)相對于非肽類物質(zhì)所占的百分比;
多肽的純度是指使用HPLC分析法在214nm(214nm是肽鏈的吸收波長)處檢測到的目標多肽的含量;
除了目標多肽外,HPLC還可以檢測到的雜質(zhì)包括:缺失序列(缺失了一個或多個氨基酸殘基的靶序列),截斷序列(加保護過程中產(chǎn)生的序列)以及脫保護不完全序列(產(chǎn)生于整個合成過程或最后的裂解過程)等;
但是,HPLC檢測不到水和殘留的鹽份如三氟乙酸鹽,醋酸鹽等,而在多肽合成過程中,多肽是通過三氟乙酸將肽序從樹脂上切割下來的,而且在純化過程中也會產(chǎn)生少量的TFA,因此,多肽游離的氨基末端和其他側(cè)鏈如Arg、Lys、His都可生成少量TFA雜質(zhì);還有一個就是水分,多肽通常采用凍干法脫水,即使如此,水也會因共價結(jié)合的能力不同而不同程度地存在著,因此,通常交付的多肽中,通常都含有TFA鹽和微量的水分,而這些都是HPLC檢測不出來的,因此,導致了肽含量和肽純度的不同。