国产亚洲一级黄色_欧美日韩性感尤物在线_日高清无码在线免费视频_看黄色黄大色黄片免费_亚洲一区二区三区日产_日韩丝袜清纯自拍_中文字幕2019年中文字幕_AV无码精品蜜桃亚洲_嫩草影院一二三永久在线观看_国产午夜国产免费不卡

首頁 > 多肽入門 > 多肽如何溶解
多肽如何溶解
瀏覽量:5120 | 2024/4/25 17:28:12

    溶解性是使用多肽時比較重要的問題。每個氨基酸都有其固有化學(xué)特性。如亮氨酸Leu、異亮氨酸Ile、頡氨酸Val是疏水性的,其他氨基酸如賴氨酸Lys、組氨酸His、精氨酸Arg是堿性親水的,再如谷氨酸Glu、天冬氨酸Asp是酸性親水的。因此不同的多肽因其組成不同而具有不同的溶解性。


     一般情況下,多肽首先選擇溶解在滅菌的蒸餾水或去離子水中。因?yàn)槎嚯娜芤嚎赡苡龅郊?xì)菌降解。為避免該現(xiàn)象的發(fā)生, 多肽應(yīng)溶解在無菌的蒸餾水中, 或者用 0.45 或 0.2 μm 孔徑的濾膜過濾除菌 (如果條件允許則用無氧水)。建議先用少量肽來試驗(yàn)最適溶解方法,只有當(dāng)多肽完全溶解后,才能加入溶液并將之稀釋至最終濃度。即先溶解,后加入緩沖液。注意:總是將多肽加入到適當(dāng)溶劑中攪拌,而不能采用其它方式。


    如果這個肽是不溶于水的,且其是酸性的,加入溫和的堿如0.1%的NH3.H2O能夠增加肽的溶解度。相反,對于堿性的肽,溫和的酸如0.1%的醋酸或TFA(三氟乙酸)能夠幫助多肽溶解。


    某些肽具有很高的疏水性時,不易溶解,可以用少量的DMF或DMSO幫助其溶解,這時推薦將多肽溶解于少量純有機(jī)溶劑,然后用水或緩沖液將其稀釋到正常的工作濃度。因?yàn)辂}會導(dǎo)致疏水性多肽的聚合,所以必須在多肽完全溶解后加入緩沖液進(jìn)一步稀釋。當(dāng)您遇到這種情況時,請您注意以下幾點(diǎn)說明:


      a. DMF或DMSO的使用有助于多肽的溶解,這是通過破壞多肽的二級結(jié)構(gòu)而助溶。


      b. 這種試劑的使用可能會對其生物活性及后續(xù)的研究工作造成干擾,請您在溶解時考慮此問題。


    疏水性多肽可以很容易地溶解在DMSO中。但DMSO可增加細(xì)胞的通透性,若多肽溶解于DMSO中則會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。高濃度的DMSO絕不可應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)中。濃度為5%的DMSO即可讓細(xì)胞膜溶解。大多數(shù)細(xì)胞株可以容忍0.5% DMSO,少許可以容忍1%的濃度,而不表現(xiàn)出嚴(yán)重的細(xì)胞毒性。然而原代細(xì)胞培養(yǎng)對其更敏感。所以如果是用原代細(xì)胞做劑量/反應(yīng)曲線(可行性),其濃度應(yīng)低于0.1%。


    對于某些疏水性非常高的多肽,可先嘗試將其溶解在少量的DMSO(30-50ul,100%)中,然后慢慢 (一滴一滴地)將其添加到不斷攪拌的水溶液如PBS或其他想要的緩沖液中,直至理想濃度。如果滴加過程中,肽溶液開始變渾濁,說明已經(jīng)達(dá)到了溶解極限。另外,超聲波有助于多肽溶解,但在使用超聲處理要注意超聲會引起溶液發(fā)熱從而造成多肽降解,所以必須在冰上操作。

經(jīng)驗(yàn):


對幾乎所有的細(xì)胞來說,濃度為0.1%DMSO是安全的。


廣泛被用于細(xì)胞培養(yǎng)的DMSO終濃度為0.5%,不會引起細(xì)胞毒性。


雖然對部份細(xì)胞來說,1%DMSO也不會產(chǎn)生細(xì)胞毒性,但我們推薦0.5%。


也有5%DMSO成功地應(yīng)用于某些細(xì)胞的案例。


始終保持終濃度在0.5%,但儲存時可200倍高濃度溶于100%的DMSO中。


    如果溶解還是有問題,聲波降解有助于溶解多肽。如果需要用到有機(jī)試劑溶解,建議在多肽加入有機(jī)試劑后即開始用超聲波助溶,溶解后再加入水或緩沖液稀釋,稀釋過程中再次使用超聲波助溶。
上篇: 多肽的結(jié)構(gòu)分析方法
下篇: 二硫鍵成環(huán)技術(shù)
返回列表
全:種類繁多,修飾齊全
快:快速發(fā)貨,順豐包郵
優(yōu):專業(yè)團(tuán)隊,品質(zhì)保證
24:客服在線,高效快捷

微信掃碼聯(lián)系客服
電話:0551-65177703  郵箱:pb@peptidesbank.com   地址:安徽省合肥市四川路868號云谷創(chuàng)新園A6棟3層
皖I(lǐng)CP備2024046425號-1