原文及參考文獻見：藥學學報2019年 何佳彧，梁菊，宣茂松，吳文瀾
摘要
多肽在基因/藥物遞送和疾病靶向治療領域應用廣泛，但天然多肽在體內(nèi)容易被蛋白酶水解，半衰期短。
很多研究致力于對多肽結構進行一定程度的改造或修飾，希望能夠提高多肽的遞送和治療效果。
本文總結了近幾年文獻報道中關于多肽穩(wěn)定性的研究報道，根據(jù)多肽結構改造方式的不同進行文獻分類，介紹了各種結構改造和修飾方法對于提高多肽的體內(nèi)循環(huán)穩(wěn)定性和半衰期的作用，有針對性地分析了影響體內(nèi)多肽穩(wěn)定性的相關因素，以期為多肽的進一步體內(nèi)研究和應用提供數(shù)據(jù)和理論參考。
正文
多肽作為新型的治療分子和優(yōu)良的藥物載體，近年來被廣泛應用到癌癥治療、腫瘤成像和免疫治療等多個領域。
作為基因/藥物載體，多肽具有低毒性、低免疫原性、高的組織滲透性和容易合成及修飾等優(yōu)點。
但由于多肽容易被多種蛋白酶所降解，并且具有很高的血液、腎臟清除率，導致其體內(nèi)穩(wěn)定性差，在實際應用中存在許多局限性。
因此，研究者嘗試多種方法來提高多肽在生物體內(nèi)參與循環(huán)的穩(wěn)定性。本論文旨在總結目前提高多肽穩(wěn)定性的方法，以期對多肽的應用提供參考。
1.多肽結構的改造
多肽之所以在生物體內(nèi)不穩(wěn)定，是因為其特殊的分子結構。
多肽主鏈上容易發(fā)生脫酰胺反應，特別是位于分子表面的酰胺基團容易被蛋白酶識別和水解。
側鏈上氨基酸殘基容易發(fā)生構象變化，例如α-螺旋的解離和鹽橋的斷裂等。
這些因素都導致多肽在體內(nèi)不能長期穩(wěn)定存在。
為了解決多肽在結構上的不穩(wěn)定性，許多研究者致力于對多肽的結構進行改造。
這些改造主要思路是降低多肽結構參與降解反應的活潑性，例如將多肽首尾相連或側鏈與側鏈相連形成環(huán)肽，將天然的L-型氨基酸替換為蛋白酶不容易識別的D-型氨基酸，改變多肽中氨基酸的序列等。
1.1 形成環(huán)肽
與直鏈肽相比，環(huán)肽具有更好的結構穩(wěn)定性。
通過二硫鍵將多肽首尾相連形成環(huán)肽或者利用半胱氨酸形成分子內(nèi)小環(huán)，使肽鏈失去游離的氨基和羧基，避免被特異性識別端基氨基和羧基的蛋白酶降解。
而且，成環(huán)的多肽分子內(nèi)會形成二硫鍵或者鹽橋，這些相互作用會進一步提高多肽的穩(wěn)定性。
Bogdanowich-Knipp等對比了直鏈RGD與環(huán)狀RGD的穩(wěn)定性發(fā)現(xiàn)，天冬氨酸是RGD肽的降解位點，其側鏈容易與肽鏈的C-端或N-端發(fā)生分子內(nèi)反應。
當RGD為線性時分子柔性較大導致參與反應的兩個原子之間距離較短，容易發(fā)生降解反應。
當RGD成環(huán)以后，分子結構的剛性得到增強，使得參與反應的原子之間的距離增大，不能發(fā)生降解反應。
另一個使環(huán)狀RGD穩(wěn)定性增加的原因是精氨酸中的胍基與天冬氨酸的羧基之間形成了鹽橋，鹽橋的存在也可以防止天冬氨酸的側鏈參與降解反應。
Gomesin是一種由18個氨基酸組成的肽鏈，其序列為ZCRRLCYKQRCVTYCRGR，其中，Z為焦谷氨酸。
該肽鏈具有抗腫瘤、抗病原微生物、抗真菌、抗利什曼原蟲和抗瘧疾作用。為了改善Gomesin在胃蛋白酶中的穩(wěn)定性，Chan等將Gomesin中處于N-末端的焦谷氨酸用甘氨酸替代，然后將Gomesin首尾相連形成環(huán)肽。
研究發(fā)現(xiàn)環(huán)肽折疊時半胱氨酸之間生成了二硫鍵使多肽結構更加穩(wěn)定，環(huán)化的Gomesin對HaLa細胞的毒性增加3倍，并且抗瘧原蟲和抗菌活性都有顯著提高。
Hymenochirin-1B是一種具有α-螺旋結構的多肽，具有廣泛的生物活性，如抗病原微生物、抗癌、免疫調(diào)節(jié)和抗糖尿病活性。
天然α-螺旋線性肽通常不能保持其預期的構象和與預期靶標的結合能力。
Li等利用釕催化的烯烴復分解的方法共價連接兩個氨基酸的側鏈使多肽形成分子內(nèi)小環(huán)，達到了使多肽hymenochirin-1B穩(wěn)定的目的。
研究者共合成了10種hymenochirin-1B肽類似物，在胰蛋白酶環(huán)境中檢測其穩(wěn)定性。結果發(fā)現(xiàn)所有含有環(huán)形肽的序列顯示出比hymenochirin-1B原序列更好的蛋白酶穩(wěn)定性，其中，H-10的蛋白酶抗性最好，半衰期為3.5h，并且H-10顯示出更好的腫瘤細胞抑制活性。
多肽分子內(nèi)或分子間的二硫鍵、α-螺旋和疏水締合作用對于多肽的蛋白酶穩(wěn)定性具有非常重要的影響。
Chen等嘗試將多肽中距離相等的兩個位置引入半胱氨酸，通過兩個二硫鍵將兩條α-螺旋肽中相對應的半胱氨酸平行或反平行連接，成為一個α-螺旋二聚體。
這種結構不僅能夠將多肽維持在α-螺旋構象，并且可以調(diào)節(jié)α-螺旋二聚體之間的疏水相互作用。
研究者使用胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶檢測多肽的穩(wěn)定性。
結果發(fā)現(xiàn)所有單體肽在0.02μmol·L-1胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶中被快速降解，半衰期為0.1～1h。研究者們增加了蛋白酶濃度，發(fā)現(xiàn)即使在7 μmol·L-1 蛋白酶濃度中2h，7=7二聚體仍然保持活性。
整體來說6=6、7=7 和8=8三個二聚體的穩(wěn)定性都得到了明顯的改善。
有趣的是，本研究并沒有觀察到肽鏈的α-螺旋構象與穩(wěn)定性之間存在關系。
但是發(fā)現(xiàn)7=7和8=8的二聚體的水溶性明顯增加，也許是由于肽鏈的疏水性殘基被掩埋在兩條肽鏈之間的界面處導致的。
由此可以推斷，疏水相互作用對二聚體在蛋白酶中的穩(wěn)定性具有重要作用。
研究者進一步探討了7=7具有如此優(yōu)異的穩(wěn)定性的原因。
觀察到反平行7=7分子二聚時，容易被胰凝乳蛋白酶識別的苯丙氨酸（F）、酪氨酸（Y）和色氨酸（W）3個裂解位點位于二硫鍵同側，也就是二聚體的內(nèi)側，規(guī)避了胰凝乳蛋白酶的降解。
1.2 使用D-型氨基酸
由于體內(nèi)蛋白酶所能識別的氨基酸為天然的L-型氨基酸，所以研究者們嘗試用D-型氨基酸來替代多肽鏈中的L-型氨基酸。
有些研究者僅將多肽鏈的C端和N端的氨基酸用D-型氨基酸替代，而有的則將多肽鏈中所有氨基酸改變?yōu)镈-型氨基酸。
Tugyi等選取MUC2 粘蛋白中的一段抗原決定簇（15TPTPTGTQTPT25），分別將C端和N端3個氨基酸替換為D-型氨基酸或者將兩端3個氨基酸同時替換為D-型氨基酸，研究它們在人血清中的穩(wěn)定性。
結果發(fā)現(xiàn)N端替換成D-型氨基酸（Pep2和Pep3）后對多肽的穩(wěn)定性具有很大提升。
如Pep2，在10％和50％血清中的降解率分別為16％和45％。在N 和C末端同時具有3個D-型氨基酸的肽鏈即使在50％人血清中96h后也是穩(wěn)定的。
其中Pep4和Pep5這兩條肽鏈既具有很高的蛋白酶穩(wěn)定性，又具有很好的特異性識別抗體的能力。
另有研究發(fā)現(xiàn)，由天然L-型氨基酸組成的七肽GICP (SSQPFWS)對在膠質(zhì)瘤細胞中高表達的VAV3 蛋白具有高親和力。
由于其獨特的氨基酸序列，不能對其進行D-型氨基酸取代，但是將其與D-型肽相連可以改善肽的蛋白酶穩(wěn)定性。
DA7R (DRDPDPDLDWDTDA)是血管內(nèi)皮生長因子受體-2（VEGFR2）和神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1）的配體。
Zhang等設計將GICP 與DA7R 通過幾個甘氨酸相連形成多肽結合體DA7R–GICP（DRDPDPDLDWDTDAGGGCGGGSSQPFWS）。
通過對比GICP、DA7R和DA7R–GICP三種肽，發(fā)現(xiàn)DA7R–GICP是一種既不影響兩種肽各自的結合位點又能改善其蛋白酶穩(wěn)定性的靶向肽。
1.3 改變多肽中單個或多個氨基酸
多肽鏈主鏈與主鏈之間、側鏈與側鏈之間主要靠靜電作用維系結構穩(wěn)定，可以通過替換掉其中幾個氨基酸來增強多肽鏈之間的靜電作用。
Chen等將裂解肽PTP-7中部分或所有賴氨酸替換為組氨酸，合成了4種肽，分別是PTP-7(FLGALFKALSKLL)、PTP-7a(FLGALFHALSKLL)、PTP-7b(FLGALFKALSHLL) 和PTP-7c(FLGALFHALSHLL)。
研究發(fā)現(xiàn)將兩個賴氨酸全部替換為組氨酸的PTP-7c肽在100%人血清中的半衰期最長，為11h。
與PTP-7相比，所有含組氨酸的肽對正常細胞的毒性顯著降低。
含有組氨酸的肽PTP-7a和PTP-7b對癌細胞保持了良好活性。
可以推測組氨酸的存在對于改善肽的穩(wěn)定性以及降低肽的細胞毒性起到了關鍵作用。
將多肽的N-端和C-端進行結構改造可以躲避氨肽酶和羧肽酶的識別。Seebach 等對神經(jīng)降壓素（NT）的兩端進行了同系化改變。
將多肽N-端和C-端分別插入一個-CH2 基團，將α-氨基酸替換為β-氨基酸，并且改變兩端氨基酸中心碳原子的(R)/(S)構型。
研究發(fā)現(xiàn)，其中一個NT類似物（H-(S)-β2hR-RPYI-β3hL-OH）在人血清中顯示出獨特的、優(yōu)異的穩(wěn)定性，可以在人血清中保持7天的生物活性。
CTT肽（CTTHWGFTLC）是一種明膠酶抑制肽，研究發(fā)現(xiàn)CTT 肽具有特異性靶向腫瘤的能力。
Björklund等利用丙氨酸逐個替換CTT肽中氨基酸殘基來尋找影響明膠酶抑制活性的關鍵殘基，發(fā)現(xiàn)色氨酸對于明膠酶抑制活性至關重要。
用色氨酸類似物5-羥色氨酸、5F-色氨酸和6F-色氨酸來替代色氨酸。
結果發(fā)現(xiàn)，5F-CTT 在血清中半衰期為3h，顯示出比天然CTT高出6倍的血清穩(wěn)定性。
同時，5F-CTT還具有更加優(yōu)良的抑制腫瘤細胞遷移的能力。5F-CTT在血清中更穩(wěn)定可能是由于疏水性氟原子引起的肽的聚集使其構象變得更緊湊。
2.多肽兩端進行修飾
將多肽兩端進行修飾是保護多肽免于蛋白酶降解的有效策略。
將多肽兩端進行脂肪鏈修飾，由于疏水作用的增加，可以增強多肽的結構穩(wěn)定性。
用PEG來修飾多肽，則可以讓多肽達到隱形的目的。
將多肽與無機化合物結合并自組裝成納米粒子則可以隱藏多肽的C-端和N-端，從而具有抗氨肽酶和羧肽酶降解的作用。
2.1 對多肽進行疏水修飾
胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）是治療Ⅱ型糖尿病的一種有效激素，但在生理條件下容易被代謝酶如二肽基肽酶IV（DPP-IV）和中性內(nèi)肽酶（NEP）快速滅活。
近年來，研究者們致力于開發(fā)長效GLP-1 衍生物。
Han等首先將半胱氨酸引入第8位上含有甘氨酸的GLP-1(7-36)-NH2（HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR）中，然后將帶有馬來酰亞胺的多條脂肪鏈與半胱氨酸的巰基相連，生成多個脂肪鏈修飾的多肽衍生物。
研究發(fā)現(xiàn)，37 ℃時，G8-GLP-1（7-36）-NH2在大鼠血漿中的半衰期僅有約0.5h。
多數(shù)衍生物的半衰期都有所增加。實驗進一步發(fā)現(xiàn)脂肪鏈的長度與半衰期有密切關系。
同樣條件下，C8脂肪鏈的半衰期為5.9h，C12脂肪鏈為24h，C16脂肪鏈為45.4h。
研究者分析體外穩(wěn)定性實驗和白蛋白結合實驗后得出G8-GLP-1（7-36）-NH2 衍生物的體外穩(wěn)定性與其白蛋白結合能力有關，推測脂肪鏈促進了多肽衍生物與血清白蛋白之間的非共價結合，提高了多肽的穩(wěn)定性。
抗菌肽（antimicrobial peptide，AMP）作為新型抗腫瘤藥物具有重要價值，該多肽具有很高的細胞特異性和對腫瘤細胞抗多藥耐藥（ multiple drugresistance，MDR）的特性。
將脂肪酸與AMP結合可以增加多肽的疏水性，使多肽的螺旋結構更穩(wěn)定， 并且有助于提高多肽的抗菌活性。
B1（VKRFKKFFRKLKKSV）屬于AMP的一種，具有對抗MCF-7乳腺癌和K562白血病細胞系的活性，對正常細胞系GES-1的毒性低。
Deng等將脂肪酸與B1相連后設計出了B1-C16和B1-GG-C16兩種脂肪酸綴合肽。
對比3種肽的穩(wěn)定性發(fā)現(xiàn)，與B1相比，B1-C16和B1-GG-C16在血清中的半衰期明顯得到改善，分別為3h和3.5h。
B1-C16和B1-GG-C16顯示出比B1更好的抗腫瘤活性，對正常細胞的毒性更小。
此外，綴合肽不僅保持了對MDR 細胞的敏感性，并且還表現(xiàn)出對MDR細胞的逆轉活性。
構建肽納米顆粒是提高多肽生物利用度的有效方法。
C16Y（DFKLFAVYIKYR）是一種整合素靶向肽。Ding等將C16Y設計為兩親性嵌合肽DEAP-C16Y。
DEAP-C16Y的疏水端由4個功能性DEAP（3-二乙氨基丙基異硫氰酸酯）疏水分子和8個亮氨酸殘基組成，利用3個賴氨酸提供與DEAP連接的伯氨基，C16Y 作為親水端，其兩端連接甘氨酸來消除末端電荷。
在生理pH條件下，DEAP-C16Y可以組裝成納米膠束。
在腫瘤部位pH值約6.8時，膠束結構解離釋放出C16Y肽。
DEAP-C16Y膠束比游離的C16Y肽具有更好的抑制血管生成、腫瘤生長和轉移的作用，原因可能是疏水性的DEAP與亮氨酸出現(xiàn)在C16Y肽的N-端，增強了C16Y肽的穩(wěn)定性。
RWR（RGDWR）是一種新型的抗血栓肽，在體外非常容易被蛋白酶降解，半衰期短。
Yang等人在RWR的N-端連接ω-氨基辛酸，得到ωRWR（H2N(CH2)7-CO-RGDWR）。
研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠血漿中4h后，RWR的濃度降低了32％至48％，ωRWR的濃度變化僅在6.2％以內(nèi)。
連接ω-氨基辛酸后的小分子肽可以避免被氨肽酶識別和降解，并且不影響其抗血小板聚集活性。
2.2 對多肽進行親水修飾
腫瘤相關巨噬細胞（TAM）是輔助癌癥治療的潛在靶標，因為它們在促進癌細胞增殖、血管生成和轉移中具有重要的作用。
M2巨噬細胞屬于TAM 的一種。巨噬細胞靶向肽（M2pep）可以與M2細胞特異性結合，但由于M2pep的水溶性差，不易在體內(nèi)發(fā)揮效力。
為了提高M2pep 在體內(nèi)的穩(wěn)定性，Ngambenjawong等將M2pep連接到一種聚合物上。
該聚合物主要由N-（2-羥丙基）甲基丙烯酰胺（HPMA）和N-（3-氨基丙基）甲基丙烯酰胺（APMA）組成。
HPMA 具有較好的親水性和生物相容性，而APMA 的作用主要是提供可以與多肽相結合的氨基。
研究者將3種M2pep肽類似物與聚合物連接，分別形成M2pep-SH、(Ac)M2pep(RY)-SH 和DFBP-cyclized M2pep(RY)-Alkyne。
研究后發(fā)現(xiàn)，與聚合物相結合后，多肽在血清中即使是24h后也保持穩(wěn)定，而3種游離肽類似物在相同時間內(nèi)活性減半。特別是將環(huán)化的M2pep(RY)與聚合物相結合后既保留了靶向性，又增加了多肽在體內(nèi)的穩(wěn)定性。
R8(RRRRRRRR)是典型的細胞穿膜肽，它可以介導藥物、核酸和高分子納米顆粒等進入細胞。
但由于R8序列是由帶正電荷的氨基酸構成，導致其容易與血漿蛋白結合，穩(wěn)定性差。
Zhang等將R8與PEG相連，PEG可以屏蔽R8上的正電荷，防止其與血漿蛋白結合，提高了R8的穩(wěn)定性，使其可以順利到達特定部位。
Cheng等將KLAK 肽與PEG 相連，保護多肽免于酶降解。
Wu等通過PEG將穿膜肽R8/環(huán)狀RGD與磷脂DSPE相連，然后嵌入負載麥角甾醇（ERG）和順鉑（DDP）的脂質(zhì)體上。
研究發(fā)現(xiàn)RGD/R8-DDP/ERG-LIP在體內(nèi)的半衰期達到24h。
穩(wěn)定性如此好的原因可能是PEG屏蔽了穿膜肽R8的正電荷，而且環(huán)狀RGD不容易被蛋白酶識別。
3.生物大分子對多肽的修飾
與其他蛋白質(zhì)相比，血漿中的白蛋白和IgG的半衰期相對較長，因此將多肽與這些蛋白結合后能夠延長多肽的半衰期。
Tian等設計將兩個白蛋白連接形成一個空腔，再將GLP-1激動劑exendin-4肽與空腔部分連接形成白蛋白-多肽-白蛋白的夾心結構。
exendin-4肽含有一個精氨酸和兩個賴氨酸殘基，它們是胰蛋白酶的切割位點，這樣的結構可以保護多肽免于酶促降解。
研究者使用EvansBlue（EB）衍生物作為連接兩個白蛋白和多肽的樞紐，設計了兩種綴合物N（tEB）2-exendin-4和NtEB-exendin-4。
胰蛋白酶消化研究結果顯示，10min后exendin-4-白蛋白復合物完全被降解，即使是50 min 后，N（tEB）2-exendin-4-白蛋白復合物仍然有70%的保留。
OSBORN等將人血清白蛋白與干擾素-α（IFN-α）連接來改善IFN-α的藥代動力學。
未修飾的IFN-α在人體中的半衰期為2～3h。
人血清白蛋白修飾的IFN-α半衰期延長18倍。
有研究發(fā)現(xiàn)，當GLP-1與免疫球蛋白的Fc結構域融合時，GLP-1的血漿半衰期將大大延長。
因此，Glaesner等開發(fā)了具有增強的藥代動力學和活性的GLP-1免疫球蛋白G（IgG4）Fc 融合蛋白。
測其在動物體內(nèi)的半衰期得出GLP-1-Fc融合蛋白在大鼠體內(nèi)半衰期約為1.5天，在食蟹猴體內(nèi)半衰期約為2天。
而游離GLP-1肽在體內(nèi)的半衰期一般只有幾分鐘。
4.對多肽進行物理包裹
除了對多肽本身進行修飾，還可以使用高分子物質(zhì)包裹多肽，在多肽與蛋白酶之間形成屏障從而保護其免于蛋白酶切割。
Qu等設計了一種納米級藥物傳遞系統(tǒng)，用于口服遞送GLP-1。
其策略是將肽附著在固體納米顆粒二氧化硅上，然后再用pH 敏感聚合物丙烯酸樹脂包裹（SPN-GLP-1）。
當pH為7.4時GLP-1釋放了80%，而當pH為1.0時GLP-1也只有30%左右的釋放，因此pH 敏感丙烯酸樹脂很好的保護了GLP-1在胃等酸性條件下的穩(wěn)定性。
在腸酶穩(wěn)定性方面，研究者將游離GLP-1 和SPN-GLP-1與腸液混合。
由于存在高濃度的消化酶和刷狀緣肽酶，GLP-1 迅速降解，半衰期為(2±0.02) min，即使在第4 min，SPN-GLP-1還有70%完整的GLP-1。
Zhao等的策略是使用具有自組裝活性的疏水蛋白將GLP-1分子包裹在自組裝腔內(nèi)，從而防止GLP-1被蛋白酶降解。
為了研究疏水蛋白形成的殼是否保護GLP-1免受蛋白酶降解，研究者向雄性大鼠皮下注射pPIC 9-hgfI/GLP-1 和pPIC-hgfI E24K/GLP-1兩種復合物，在不同的時間節(jié)點取靜脈血測GLP-1含量。
4h后，游離GLP-1組檢測不到完整GLP-1的存在。
96h后，pPIC 9-hgfI/GLP-1組仍能檢測到GLP-1存在，但pPIC-hgfI E24K/GLP-1組未檢測到。這些數(shù)據(jù)表明，pPIC9-hgfI/GLP-1復合物能夠顯著延長大鼠體內(nèi)GLP-1的半衰期。
Figure 7 Composite process between GLP-1 and hydrophobinGB 病毒C（GBV-C）中的E1片段被發(fā)現(xiàn)可以抑制HIV的復制，因此研究者使用E1 來開發(fā)對抗HIV-1的新策略。
然而E1與其他肽一樣，也存在口服生物利用度低、半衰期短和清除率快等缺點。
Ariza-Sáenz等使用雙乳液法制備一種W/O/W的載藥體系，將E1包封在內(nèi)部，以達到提高E1 的血清穩(wěn)定性的目的。
油相載體為聚（D，L-乳酸-乙醇酸共聚物）（PLGA），最外層水相載體為乙二醇殼聚糖（GC）。
研究者對比了E1和E1NPs在血清中的穩(wěn)定性得出，游離的E1肽的半衰期約為8h，然而，對于包裹在NP中的E1肽，觀察到增強的穩(wěn)定性，半衰期延長至24h。分析原因得出，與肽從體系中緩慢釋放有關。
Wang等則設計了一種W/O/O體系，外層油相為硅油，內(nèi)層油相為PLGA，將艾塞那肽包封在中間。
比較了艾塞那肽組和艾塞那肽微球組的血漿藥物濃度后發(fā)現(xiàn)，艾塞那肽組在藥物注射后0.75h后濃度達到最大值，隨后在2h后消失。
而艾塞那肽微球組的血漿藥物能持續(xù)30天。
將多肽包封在微囊內(nèi)部可以避免多肽暴露在血漿環(huán)境中，同時控制多肽的釋放，從而達到長效的目的。
5.多種修飾聯(lián)合使用
聯(lián)合使用多種方法對多肽結構進行改造，不僅可以改善多肽的穩(wěn)定性，而且可以增強多肽的細胞結合能力、抗腫瘤能力以及克服血腦屏障的能力。
M2肽（YEQDPWGVKWWYGGGSKK(K-Biotin)）可以在CT-26結腸癌模型中成功的靶向M2巨噬細胞。
但是，M2肽的血清穩(wěn)定性差，這限制了M2肽在體內(nèi)的作用。
研究者發(fā)現(xiàn)，M2肽血清穩(wěn)定性差主要是因為其肽鏈N末端的溶解性切割和W10/W11和S16/K17位點的內(nèi)切裂解。
Ngambenjawong等對M2肽進行N-末端乙�；-氨基酸取代和環(huán)化等改變后，合成了一種M2肽的衍生物Cyclic-M2pep(RY)Biotin肽（ CGYEQDPWGVRYWYGCDKDKDK(K-Biotin)）。
此肽通過將M2肽進行環(huán)化來消除N-末端的切割，將末端3個賴氨酸替換為D-型氨基酸，改善了S16/K17位點處的血清穩(wěn)定性。
改造后的M2肽在血清中即使是48h后仍可被檢測到，顯示出非常好的血清蛋白酶穩(wěn)定性，并且與受體結合的能力也得到了很好的改善。
CTT2肽是參與腫瘤血管生成和遷移的明膠酶和基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9和MMP-2的選擇性抑制劑。
由于MMP-9和MMP-2幾乎只存在于腫瘤血管生成中并起著重要作用，所以這些蛋白酶是腫瘤靶向藥的靶標。
Haikola等將環(huán)狀CTT2 肽的N-端與聚乙二醇（PEG）化的脂鏈羧基端相連，形成一個兩親性的結構DSPE-PEG（3400）-CTT2
DSPE-PEG（3400）-CTT2的半衰期得到了明顯改善。
DCDX是能夠繞過血腦屏障（BBB）的尼古丁乙酰膽堿受體（nAChRs）的D-肽配體，DA7R是血管內(nèi)皮生長因子受體2（VEGFR-2）和神經(jīng)氈蛋白-1（NRP-1）在血管生成中過表達的D-肽配體。
D-型氨基酸組成的多肽DCDX 相較于CDX 在蛋白酶中具有明顯的穩(wěn)定性。
Ying等將DCDX 和DA7R 和PEG 相連，然后再與DSPE 連接形成兩親性單體，將該單體嵌入脂質(zhì)體中。
研究發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)體在體內(nèi)的穩(wěn)定性得到了改善，并且成功繞過了血腦屏障（BBB）和血腦腫瘤屏障（BBTB）。
該課題組還研究了CDX、DCDX 和c(RGDyK)的血清穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)L-型多肽在血清蛋白中的半衰期只有約0.25 h，D-型CDX和c(RGDyK)即使在24h后依然保持90%以上的活性。
YSV是一種通過阻斷細胞周期和抑制組蛋白去乙�；富钚缘木哂锌拱┳饔玫男《屉摹�
Ren等將YSV與D-型氨基酸結合并自組裝成納米纖維。
通過對比GDFDFDYGYSV（D-YSV）和GFFYGYSV（L-YSV）水凝膠的穩(wěn)定性以及抗腫瘤能力等發(fā)現(xiàn)，在蛋白酶K溶液中，游離的YSV小肽在0.5h后完全降解，GFFYGYSV（L-YSV）雖然比游離的YSV穩(wěn)定性稍好，但在4h后也被完全降解。
而GDFDFDYGYSV（D-YSV）即使是在24h后仍然保持初始結構，表現(xiàn)出了極好的穩(wěn)定性。
6.展望與發(fā)展
多肽作為治療分子和藥物/基因載體，在多個領域備受關注。
但是由于多肽的不穩(wěn)定性，許多應用受到限制。
目前，對多肽進行結構改造是提高其穩(wěn)定性的有效手段。
然而，對多肽進行結構改造也存在一些困難，例如非天然氨基酸取代和環(huán)化在合成上很費力或是難以實施。
另一個實際的問題是，如果只考慮多肽穩(wěn)定性方面的因素，容易忽視多肽生物活性方面的影響，所以需要在改善多肽穩(wěn)定性的同時保留或提高多肽的生理活性，這就對結構改造提出了更高的要求。
作者認為根據(jù)每種肽的特點，選擇合適的改造或修飾方法可能是目前比較可靠、比較理想的策略。
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